[发明专利]一种无需解剖可判断中华鳖胚胎发育时相的方法

说明书

技术领域

本发明属于温度决定型性别决定动物性别分化和性别调控领域，特别是涉及一种无需解剖可判断中华鳖胚胎发育时相的方法。

背景技术

中华鳖(Trionyxsinensis)隶属爬行纲(Reptilia)、龟鳖目(Testudinata)、鳖科(Trionychidae)、鳖属(Pelodiscus)，是我国名贵的食用水产动物，其营养丰富，可以入药，在国内外市场上十分畅销。中华鳖属于温度性别决定型动物，它的性别取决于孵化过程中某一特定时期(温度敏感期)的孵化温度，在此期间高温孵化会产生较多雄性鳖苗，反之产生较多雌性鳖苗。由于雄性中华鳖生长速度快于雌鳖，食用价值也高于雌鳖，因此，中华鳖的定性育种技术备受关注。

由于温度性别决定型动物的性别是在其胚胎发育的温度敏感期(龟多数在15～17期)内由温度决定的，因此，其胚胎发育时相的准确划分(特别是14时相以后)对于其性别调控非常重要。胚胎发育时相的划分方法通常是通过定期解剖在解剖镜下观察来确定的。

国际上普遍采用Yntema([1]YntemaC.AseriesofstagesintheembryonicdevelopmentofChelydraserpentine[J].JournalofMorphology,1968,125:219-251)的分期标准进行龟胚胎发育时相的划分，关于中华鳖胚胎发育时相的划分国内外至今没有一个系统报道。

国内外关于中华鳖已有一些报道，主要涉及提高中华鳖产卵量及长卵质量的养殖方法(中国专利CN103918605)、纯种繁育方法(中国专利CN103843722A)和性别控制方法(中国专利CN102988986A、CN102487883A、CN102934623A)。目前未见到通过外观判断龟鳖胚胎发育时相的文献报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种无需解剖可判断中华鳖胚胎发育时相的方法。

本发明包括以下步骤：

1)在中华鳖孵化季节，采集中华鳖受精卵进行裸孵；

2)在整个裸孵过程中观察受精斑的变化情况，通过光照观察血丝的变化情况并拍照记录。孵化第一周时相变化很快且胚胎太小无法对其肉眼观察进行准确判断，因而，孵化第一周并未进行胚胎解剖观察，从孵化第8天开始每天取4～6枚受精卵观察外观随后解剖，在立体显微镜下观察胚胎发育情况，进行文字描述并拍照记录，参考Yntema^[1]描述的龟胚胎发育时相的划分标准对中华鳖的胚胎发育时相进行划分。

在步骤1)中，所述裸孵可采用孵化装置进行裸孵，所述孵化装置设有离心管和解剖盘，受精卵的动物极向上平放在离心管架上，受精卵间距保持在1～1.5cm，离心管架置于解剖盘上，解剖盘中盛水，水深2～3cm，将孵化装置置于可控温、控湿的孵化室内，孵化室的相对湿度为65％～88％，孵化温度为26～33℃。

在步骤2)中，所述整个裸孵过程涵盖中华鳖胚胎发育敏感期开始前直到胚胎发育结束的整个过程。

中华鳖胚胎发育时相判断可参考Yntema^[1]的划分方法并对中华鳖的时相发育做了重新定义。根据受精卵外观、胚胎日龄及胚胎形态特征变化将整个胚胎发育过程分为26期，主要以头部、四肢、背甲及腹甲的变化作为分期依据。

本发明首次与国际通用的龟胚胎发育时相标准进行比对，确定了中华鳖胚胎发育时相，使得从事中华鳖性别分化与调控研究的学者得到的结果具有可比性，为龟鳖性别分化比较研究奠定基础。本发明解决中华鳖胚胎发育时相的准确判断问题，特别是无需解剖受精卵，仅通过外观观察确定其胚胎发育时相，为提高中华鳖性别调控技术奠定了基础；对于生产企业而言，本发明为普通生产者成功进行中华鳖单性育种奠定了坚实的基础。

本发明首次按照国际通用的Yntema^[1]标准对中华鳖温度敏感期开始以前至胚胎发育结束期间胚胎发育时相进行了系统描述。

本发明在于无需解剖受精卵，通过受精卵外观观察可以得到中华鳖温度敏感期开始前到胚胎发育结束整个过程的准确的发育时相。

本发明首次提出通过外观观察确定中华鳖胚胎发育时相划分的方法，特别是首次参考国际通用的龟胚胎发育时相划分标准对中华鳖的胚胎发育进行划分，特别是给出了中华鳖温度敏感期开始前直到胚胎发育结束整个过程中华鳖受精卵外观形态特征。本发明可以准确定位中华鳖胚胎发育时相，为后期进行中华鳖性别调控研究和操作提供了有力支撑。

运用本发明进行中华鳖胚胎发育时相判断的主要优点在于：