[发明专利]枸杞子的新用途

说明书

本发明公开了枸杞子在制备人胚胎干细胞定向分化为类卵细胞的诱导液中的用途。本发明还公开了人胚胎干细胞定向分化为类卵细胞的诱导液及诱导分化方法。本发明诱导液能诱导人胚胎干细胞定向分化为类卵细胞，可以为体外受精技术提供原材料，克服超排卵技术的种种缺陷，应用前景优良。

技术领域

本发明涉及一种枸杞子的新用途，具体地，是在制备促进胚胎干细胞向类卵细胞的诱导液中的用途。

背景技术

近年来，由于环境污染严重、工作压力加大、饮食习惯改变、生殖系统疾病等因素对正常受孕造成不利影响，不孕症患者数量呈上升势头，发病率约为12.5％～15％，且有逐年增加趋势。因此世界卫生组织(WHO)宣布将不孕症与心血管病、肿瘤并列为当今影响人类生活和健康的三大主要疾病。自1978年全球首例试管婴儿诞生以来，以体外授精-胚胎移植(IVF-ET)为代表的辅助生殖技术(ART)的引入给不孕不育症的成功治疗提供了更大的可能。助孕的相关研究对于解决不孕不育患者的实际问题具有现实的意义。

体外受精(IVF)是指哺乳动物的精子和卵在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术。获取合格的卵和精子，是体外受精的基础，目前，体外受精包括促排卵、卵泡检测与取卵、精子的优选与处理和体外受精步骤。诱发多个卵泡发育的促排卵是不孕治疗的重要基础，此环节早时使用自然周期排卵，但每一自然周期一般仅有一个卵泡成熟，提供卵少，导致实施以后步骤困难，且妊娠率低，现已被超排卵技术所取代。然而，超排卵技术是指应用人类促性腺激素促进更多卵泡成熟排卵的一种技术，由于此过程多个同时发育，雌二醇增加，引起反馈性的黄体生成素(LH)峰出现，导致卵早熟，质量差，妊娠率低，而且因药物过度使用引起的并发症，如卵巢过度刺激综合征(OHSS)、多胎妊娠、出生缺陷和表遗传学修饰异常等。因此，急需寻找其他合适的方法，制备生殖细胞。

同时，对于因机能衰退，体内无法发育得成熟生殖细胞的人群，如，绝经妇女，更需要寻找一种体外制备生殖细胞的方法。

枸杞子，为茄科植物宁夏枸杞Lycium barbarum L.的干燥成熟果实。夏、秋二季果实呈红色时采收，热风烘干，除去果梗，或晾至皮皱后，晒干，除去果梗。性味:甘，平。归经:归肝、肾经。功效:滋补肝肾，益精明目。主治:用于虚劳精亏。医膝酸痛，眩晕耳鸣，内热消渴，血虚萎黄，目昏不明。

胚胎干细胞，简称ES、EK或ESC细胞，是早期胚胎(原肠胚期之前)或原始性腺中分离出来的一类细胞。目前，未见枸杞子影响胚胎干细胞向生殖细胞方向分化的报道。

发明内容

本发明的技术方案是提供了一种诱导人胚胎干细胞定向分化为类卵细胞的方法。

本发明首先提供了枸杞子在制备人胚胎干细胞定向分化为类卵细胞的诱导液中的用途。

类卵细胞，是指具有卵细胞样结构，表达卵细胞标志物的细胞。

本发明还提供了人胚胎干细胞定向分化为类卵细胞的诱导液，它以细胞培养基为基础培养液，添加有终浓度为2～20％(v/v)的含药血清；所述含药血清按照如下方法制备：

(1)取枸杞子，以5.0g/kg的剂量施用于鼠，施用方式为口服给药；

(2)给药30min、60min、90min后，眼底静脉丛取血，分别静置、离心得上清液，混匀，即为含药血清。

其中，所述细胞培养基的制备方法如下：取DMEM/F-12(1：1)培养基，加入1/4倍体积的血清替代品，混匀，再加入bFGF和非必须氨基酸，得基础培养液，其中，bFGF的终浓度为4ng/mL，非必须氨基酸的终浓度为1％(v/v)。

其中，所述含药血清的终浓度为3％(v/v)。

步骤(2)中，静置的时间为2h，离心转速为3000rpm，离心时间为10min。