[发明专利]一种提高拜氏梭菌对4-羟基肉桂酸抗逆性的方法有效
| 申请号： | 201610076666.4 | 申请日： | 2016-02-03 |
| 公开（公告）号： | CN105567603B | 公开（公告）日： | 2019-08-09 |
| 发明（设计）人： | 郭亭;孙东磊;王庆福;斑文婷;黄清铧;陈瑞荣;梁磊;安玉兴 | 申请（专利权）人： | 广东省生物工程研究所（广州甘蔗糖业研究所） |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12P7/16;C12R1/145 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 许飞 |
| 地址： | 510316 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 拜氏梭菌 羟基 肉桂 抗逆性 方法 | ||
1.一种提高拜氏梭菌对4-羟基肉桂酸抗逆性从而提高丁醇产量的方法，其特征在于：该方法是将拜氏梭菌中依赖于NADH的辅酶Q氧化还原酶亚基A失活，所述拜氏梭菌为拜氏梭菌NCIMB 8052，其中，使辅酶Q氧化还原酶亚基A失活的方法为使编码辅酶Q氧化还原酶亚基A的基因失活，使该基因在拜氏梭菌中不能正常表达，该基因的碱基序列如SEQ ID NO：1所示。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述使编码辅酶Q氧化还原酶亚基A基因失活的方法选自碱基突变失活、碱基插入失活、碱基缺失失活。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：通过碱基插入失活的方法使编码辅酶Q氧化还原酶亚基A的基因失活。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：通过插入二型内含子使编码辅酶Q氧化还原酶亚基A的基因失活。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述通过插入二型内含子使编码依赖于NADH的辅酶Q氧化还原酶亚基A的基因失活，具体操作包括如下步骤：
1）将SEQ ID NO：2所示的内含子序列S-62连接到二型内含子基因敲除质粒中，得到重组质粒；
2）将步骤1）得到的重组质粒进行甲基化；
3）将步骤2）得到的甲基化的重组质粒转化拜氏梭菌，筛选得到编码依赖于NADH的辅酶Q氧化还原酶亚基A基因失活的菌株。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：SEQ ID NO：2所示的内含子序列的基因插入位点为SEQ ID NO：1中第62位和第63位碱基之间。
7.拜氏梭菌在存在4-羟基肉桂酸的情况下发酵制备丁醇中的应用，所述拜氏梭菌按权利要求1～6任一所述方法改造得到。
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