[发明专利]一种可提高虎杖愈伤组织中白藜芦醇含量的培养液及培养方法

权利要求书

1.一种可提高虎杖愈伤组织中白藜芦醇含量的培养方法，其特征在于采用以下步骤：

A、虎杖愈伤组织的诱导：选择虎杖茎段为外植体，在培养基中光照0 lx培养25天，诱导出愈伤组织，每20天继代一次，继代培养3次；所述培养基为MS基础培养基中添加6-苄氨基嘌呤、6-糖基氨基嘌呤、萘乙酸、精胺、亚精胺、蔗糖而成，所述培养基中6-苄氨基嘌呤浓度为1.0 mg/L，6-糖基氨基嘌呤浓度为0.5 mg/L ，萘乙酸浓度为0.2 mg/L ，蔗糖浓度为30g/L，琼脂浓度为8 g/L，培养基pH 5.8，培养温度25±1 ^oC；

B、愈伤组织悬浮扩大培养及次生代谢产物白藜芦醇的诱导：以步骤A中获得的生长旺盛、疏松、易散的愈伤组织为悬浮培养体系的种子细胞，将其接种在一种可提高虎杖愈伤组织中白藜芦醇含量的培养液中进行悬浮扩大培养，接种量为60~110 g/L，g/L=愈伤组织鲜重/培养基体积，得到含有愈伤组织的培养液；所述一种可提高虎杖愈伤组织中白藜芦醇含量的培养液是含有0.5~1.8 mg/L 6-苄氨基嘌呤、0.3~1.0 mg/L 6-糖基氨基嘌呤、0.15~0.45 mg/L萘乙酸、1.0~4.5 mg/L精胺、0.5~1.25 mg/L亚精胺、20~50g/L蔗糖的MS培养液，培养液pH为5~6；对所得含有愈伤组织的培养液进行诱导悬浮培养，诱导悬浮培养的条件为：振荡培养，摇床转速90~130 rpm，光照强度1280~1760 lx，光照时间12~16 h/day，培养温度25±1 ^oC，培养过程中每天向培养液中充入清洁无菌空气一次；每12~16天继代培养一次，继代培养2~4次后将继代周期缩短至6~10天，缩短继代周期后继续培养3~5代；在诱导悬浮培养继代周期的第4~8天，继代周期缩短后则在第2~5天时加入甲瓦龙酸内酯，甲瓦龙酸内酯在培养液中的终浓度为50~120 mg/L，诱导悬浮培养结束后得到白藜芦醇含量高的虎杖愈伤组织细胞。