[发明专利]育苗水体生物安全性检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及海水水质生物安全性检测生物技术，具体是一种育苗水体生物安全性检测方法。

背景技术

近年来，随着我国社会经济的迅速发展，工农业进入了高速发展时期，大量富含各种污染物的工业废水及携带化肥农药等污染物的农业废水，随着地表径流直接排入到江、河、湖泊等环境水体中，超过水体自净能力，导致我国各类水体水质持续恶化。污水中不能短时间被分解的物质随着河流进入近海海域，同时，近海的工农业废水携带的污染物、养殖区污染和用药造成的污染物最终都进入近海环境。当污染物总量超过海域的自净能力以后，近海的海水水质呈现不断恶化的趋势。

优质的水质是保证育苗行业顺利发展的基础，水生生物的卵和幼体对水体中的氨氮、亚硝酸盐、重金属、难降解的有毒有害物质极为敏感，当存在痕量的物质后，就可能造成卵的发育率低，幼苗的生长速率慢，发病率高，甚至某些未知的因素导致育苗失败，造成重大的经济损失。因此在育苗前期及育苗过程中监测水质的安全性就极为必要。

发光细菌法检测水质安全性，具有灵敏、快速、准确、自动化程度高、人为错误少等优点，其测试结果与理化分析方法和其他急性毒性测试法的结果具有良好的相关性。利用该方法能够检测常规方法无法检测的痕量污染物，也可以检测污染物之间的叠加效应。该方法也有一定的不可避免的缺陷。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服上述现有技术的不足，提供一种工艺简单，操作简便，具有快速、方便，对环境样品检测敏感的育苗水体生物安全性检测方法。

本发明解决上述技术问题采用的技术方案是：一种育苗水体生物安全性检测方法，其特征在于：选取发光细菌并以2216E培养基活化和培养发光细菌，在接种量为5%的条件下，培养12h制成菌悬液，调整到每毫升2*10⁶的密度，然后加入适量的待测水样和标准水样，在28-30℃的条件下震荡15min，然后测定发光强度，根据发光细菌发光强度的衰减大小，判定该育苗水体是否含有不利于幼苗或卵发育的有毒有害物质。

所述的发光细菌为海洋发光细菌PhotobacteriumphosphoreumXB1、XB2。该类发光细菌分离自近岸海水环境，两种细菌在近岸的海水中大量存在，适应性强，在合适的条件下发光强度大，发光周期长。

所述发光细菌的活化和培养方法是：从试管斜面中接种菌株XB1或菌株XB2，并在2216E平板划线培养得到单菌落.然后从平板上挑取单菌落接种于2216E液体培养基，于25-30℃、100-300r/min培养12h至平台期此时处于平台期的菌液的OD600nm值和相对发光单位均为最大，适于检测样品的生物安全性。

所检测的育苗水体为近岸海水，没有受到明显的污染，即理化指标如COD、氨氮、悬浮物等已经符合对育苗水质的要求，其中盐度在2.5-3.0%之间，用荧光光度计在灵敏度33%的情况下，合适条件下发光强度不少于6500。与标准海水相比，所测水样发光率下降超过25%，可能导致育苗水体会有生物的不良反应。

本发明采用上述技术方案，其利用海洋发光细菌对育苗水体水质的综合生物安全性进行检测。根据发光细菌发光强度的衰减大小初步判定该海水是否含有不利于幼苗或卵发育的有毒有害物质，解决化学方法难于检测或检测不了的问题。对照现有技术，本发明工艺简单，操作简便，具有快速、方便，对环境样品敏感的特点，可以实现对养殖水质的快速检测，弥补化学检测或物理检测的不足。其特别适合近海对养殖育苗水体安全性的检测。

具体实施方式

一种育苗水体生物安全性检测方法，首先选取发光细菌，并以2216E培养基活化和培养发光细菌，在接种量为5%的条件下，培养12h制成菌悬液，调整到每毫升2*10⁶的密度，然后加入适量的待测水样和标准水样，在28-30℃的条件下震荡15min，然后测定发光强度，根据发光细菌发光强度的衰减大小，判定该育苗水体是否含有不利于幼苗或卵发育的有毒有害物质。

所述的发光细菌为海洋发光细菌PhotobacteriumphosphoreumXB1、XB2。该类发光细菌分离自近岸海水环境，两种细菌在近岸的海水中大量存在，适应性强，在合适的条件下发光强度大，发光周期长。