[发明专利]一种针对人源抗体Fc片段的纳米抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种针对人源抗体Fc片段的纳米抗体以及应用，所述纳米抗体具有SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列的VHH链，其编码基因序列如SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30所示。通过本发明所公开的纳米抗体基因序列及宿主细胞，该纳米抗体能够在大肠杆菌内高效表达，应用于人源抗体和带有人源抗体Fc片段(标签)的重组蛋白的纯化和检测。

技术领域

本发明涉及一种针对人源抗体Fc片段的纳米抗体及其应用，属于生物技术或生物医学领域技术领域。

背景技术

抗体(Antibody)是一种由机体免疫系统针对外源物质(如细菌、病毒的蛋白)所产生的一种球状蛋白质，因此又被称为免疫球蛋白(Ig)。抗体通常由B细胞产生，在机体的免疫系统中行使多种生理学功能。抗体有多种类型，其中由B细胞分化而来的浆细胞所分泌的IgG型抗体是最普遍、最重要的一种类型，通常存在于脊椎动物的体液中，在成人的血液中含量能达到约10g/L。通常人们所说的抗体，即是指IgG型抗体。抗体是由两条相同的重链和两条相同的轻链通过二硫键结合形成的、对称的Y型结构，Y型结构的两臂末端是抗原结合的部位，被称为Fab片段，Y型的柄部被称为Fc片段。

由于抗体能够高效、特异地与体内和体外的各种抗原蛋白结合，使得抗体不仅能应用于调节免疫系统功能，还可以应用于各种高灵敏的检测方法。目前，抗体药物是生物技术药物最重要的组成部分，抗体试剂也是医学诊断和生物学研究中最常用到的试剂之一。因此，抗体相关的生物产品具有极高的应用前景和商业价值。抗体可以通过多种途径获得，例如：动物或人的血液、细胞培养、注射杂交瘤细胞的鼠的腹水等，但这均需要有效的方法进行纯化，以获得具有应用价值的抗体产品。目前最常用的抗体纯化方法是利用特殊蛋白质与抗体的Fc片段之间的高亲和力进行亲和层析。在进行抗体产品的工业生产的过程中，亲和层析是其中最为关键的一步，也是整个生产中耗费最高的部分。

目前，纯化抗体普遍使用Protein A或Protein G偶联的交联琼脂糖进行亲和层析。但是，使用Protein A/G进行抗体纯化，首先要进行Protein A/G的表达和纯化，而Protein A/G通常表达量较低，这就大大增加了抗体亲和层析的成本。在科研方面，有大量蛋白质采用融合人源Fc片段进行表达，以便识别和纯化，这都需要获得针对人源抗体Fc片段的抗体。

因此，人们一直在努力探究新的方法来克服这些困难，针对人Fc片段的新型纳米抗体将有可能解决这一难题。纳米抗体是来源于骆驼科动物或软骨鱼的特殊抗体。研究表明，骆驼体内存在一种天然缺失轻链只含重链的抗体，称为重链抗体。克隆重链抗体的可变区可得到只由一个重链可变区组成的单域抗体，称为VHH抗体。VHH抗体的晶体直径仅有2.5nm，长4nm，因此又被称为纳米抗体。纳米抗体的大小只有传统IgG型抗体的十分之一，是天然存在的可与抗原结合的最小片段。纳米抗体能被单基因编码，可以很容易的利用微生物进行生产，并具有很高的产率。

发明内容

发明目的：为了解决上述技术问题，本发明筛选获得Anti-Fc的纳米抗体，并建立基于抗人源Fc片段纳米抗体的亲和层析方法，用于替代Protein A/G，以降低实验室和工业化在纯化人源抗体和含人源抗体Fc片段的融合蛋白时的成本。

技术方案：为了实现上述发明目的，本发明提供了一种针对人源抗体Fc片段的纳米抗体，所述纳米抗体具有SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23或SEQ IDNO：24所示的氨基酸序列的VHH链，其编码核苷酸序列如SEQ IDNO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29所示。

作为优选，所述VHH链包括框架区FR和互补决定区CDR；

所述框架区FR包括FR1、FR2、FR3、FR4的氨基酸序列，其氨基酸序列分别为：