[发明专利]对抗肌肉病症的方式和方法

说明书

本发明提供了缓解杜兴氏肌营养不良或贝克型肌营养不良的一个或多个症状的方式和方法。将利用提供给患者功能性蛋白的化合物的治疗与至少一种减少炎症优选减少肌肉组织炎症的辅助化合物，和/或至少一种改善肌纤维功能、完整性和/或存活的辅助化合物组合。

发明领域

本发明涉及分子生物学和医学领域。

发明背景

肌肉病症是一种通常对个体生活有明显影响的疾病。肌肉病症可能有遗传原因或非遗传原因。与遗传原因相关的一类重要肌肉疾病是贝克型肌营养不良(Becker MuscularDystrophy，BMD)和杜兴氏肌营养不良(Duchenne Muscular Dystrophy，DMD)。这些病症是由肌肉蛋白的基因缺陷引起的。

贝克型肌营养不良和杜兴氏肌营养不良是相对高发病率的遗传性肌营养不良。在杜兴氏和贝克型肌营养不良两者中，肌肉蛋白肌肉营养不良蛋白受到影响。在杜兴氏肌营养不良中缺乏肌营养不良蛋白，而在贝克型肌营养不良中存在一些肌营养不良蛋白，但其产量大部分时候都是不够的和/或存在的肌营养不良蛋白是异常形成的。两种疾病都与隐性X连锁遗传相关。DMD是由DMD基因的移码突变造成的。DMD基因中的移码导致截短的非功能性肌营养不良蛋白的产生，引起渐进性肌肉萎缩和无力。当突变不导致DMD基因的移码时，发生BMD。在BMD中，存在一些肌营养不良蛋白，与此相反，DMD缺乏肌营养不良蛋白。BMD具有比DMD严重性更轻的症状。DMD的发作早于BMD。DMD通常在儿童早期就表现出来，而BMD是在十几岁或成年早期。BMD的发展比DMD缓慢且更难以预测。BMD患者可存活至成年中期至晚期。DMD患者很少能存活超过三十岁。

在肌纤维中，肌营养不良蛋白发挥着重要的结构作用，联接细胞外基质和细胞骨架。N末端区结合肌动蛋白，而C末端是肌营养不良蛋白糖蛋白复合物(DGC)的一部分，该复合物跨越肌膜。缺乏肌营养不良蛋白时，机械应激会导致肌浆破裂，使钙未受控制地流入肌纤维内部，由此触发钙激活的蛋白酶和纤维坏死。

对于大部分遗传性肌营养不良，目前没有临床可应用的和有效的治疗。现在探索外显子跳跃技术以对抗遗传性肌营养不良。最近我们和其他人已报道了有关基因治疗的可喜成果^1-11，该基因治疗旨在恢复mdx小鼠和DMD患者的细胞中肌营养不良蛋白前mRNA(pre-mRNA)的读框(reading frame)。通过特定外显子的靶向跳跃，DMD表型(缺乏肌营养不良蛋白)被转化成更轻度的BMD表型(部分转化为大量功能性肌营养不良蛋白)。优选通过靶向一个或两个剪接位点或外显子内在序列的反义寡核糖核苷酸(AONs)的结合来诱导外显子的跳跃。因为当两个剪接位点由剪接体复合物所识别时，外显子只内含在mRNA中，因此剪接位点是AONs的明显靶标。可选地，或另外，采用对一个或多个外显子序列的至少一部分具有特异性的一个或多个AONs。采用对外显子46序列具有特异的外显子内部AONs，我们以前就可以在外显子45缺失的两个不同DMD患者的培养的肌管中调节剪接模式¹¹。AON处理之后，外显子46发生跳跃，这在至少75％的细胞中导致读框恢复并诱导肌营养不良蛋白的合成。最近我们发现，采用外显子内部AONs，也可在人类对照和患者肌肉细胞中针对39个不同DMD外显子有效地诱导外显子跳跃^{1，2，11-15}。