[发明专利]一种基于多肽识别基团的荧光探针、其制备方法及其对铜离子与氰根离子的检测方法

权利要求书

1.一种制备基于多肽识别基团 的荧光探针的方法，其特征在于：

所述荧光探针的探针分子化合物结构通式如下：

上述结构通式中，R₁、R₂各自独立选自具有1至8个碳原子的烷基链的的任一种，R₃选自氢、氯、溴、碘、羟基、甲氧基或乙氧基中的任一种；

将香豆素-3-羧酸骨架溶解在良性有机溶剂中，加入羧基、氨基偶联试剂进行活化反应，然后加入三肽物质反应，再向反应体系中加入不良溶剂使产物沉淀出来，将沉淀用高效液相色谱分离得到探针分子化合物，

其中，所述香豆素-3-羧酸骨架结构通式如下：

所述香豆素-3-羧酸骨架的5位取代基R₃选自氢、氯、溴、碘、羟基、甲氧基或乙氧基中的任一种，7位取代N的连接基团R₁、R₂各自独立选自具有1至8个碳原子的烷基链的任一种；

所述三肽物质由两个甘氨酸与一个组氨酸组成，其结构如下所示：

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述良性有机溶剂选自NMP、DMF或THF中的一种，所述羧基、氨基偶联剂选自DIC、DCC、HOBt、HBTU中的一种或两种，所述不良溶剂选自乙醚、甲醚或石油醚中的一种。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：反应温度为20-50℃，反应时间为1-24h。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述香豆素-3-羧酸骨架的浓度为1-10mM，所述羧基、氨基偶联剂的浓度为1-10mM，所述三肽物质的浓度为1-10mM。

5.如权利要求1-4任一项所述的制备方法，其特征在于：步骤如下：

将7-二乙胺基香豆素-3羧酸溶解于DMF中，加入DIC与HOBt进行活化，然后加入三肽进行偶联反应，再向反应体系中加入乙醚使产物沉淀出来，将沉淀用高效液相色谱分离纯化得到探针分子化合物。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于：步骤如下：

(1)将7-二乙胺基香豆素-3羧酸溶解于DMF中，25℃的室温下搅拌溶解，然后加入DIC和HOBt偶联试剂，继续搅拌活化反应1h，用薄层色谱监测反应进程，待原料反应完毕生成活化中间体；

(2)在上述溶液中缓慢滴加含有三肽Gly-Gly-His的DMF溶液，在2h时间内滴加完毕，反应继续进行3h，用薄层色谱监测反应进程，待原料反应完毕，向反应溶液体系中加入冰乙醚，-4℃下冷冻离心收集沉淀产物，用高效液相色谱分离得到纯的探针化合物；

其中，7-二乙胺基香豆素-3羧酸用量2mmol，DIC用量2mmol，HOBt用量2mmol，三肽Gly-Gly-His用量2mmol，DMF量20mL，冰乙醚用量80mL。