[发明专利]α1-微球蛋白检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明是属于医学免疫领域，涉及一种免疫检测试剂，进一步说，本发明涉及α1- 微球蛋白检测试剂盒。

背景技术

本发明适用于α1-微球蛋白测定试剂盒，该产品用于体外定量测定人血清或尿液 中α1-微球蛋白的含量，作辅助诊断用。α1-微球蛋白(α1-MG或AMG)为评价肾功能的指标，尿 液浓度增高主要见于肾小管损害，如慢性肾功能衰竭等；血清水平增高则提示有各种肾病 导致的肾功能不全，如肾小球损伤早期、原发性肾小球肾炎、间质性肾炎、糖尿病肾病等，血 淸水平降低则提示重度肝功能损害，见于肝病患者。

诊断方法：α1MG的测定一般采用RIA法、ELISA法与CLlA法、乳胶免疫比浊法等，但 在临床上多采用乳胶免疫比浊法

血清（含α1mG）+试剂（乳胶抗人α1mG抗体）━━━━抗原抗体复合物

产生浊度变化,在一定的波长下检测,其浊度的变化与其含量成正相关。

目前抗体与乳胶的连接通常使用化学偶联法，其作为R2试剂，非常容易发生聚结， 使得试剂质量随着存放时间的延长而下降。使试剂的稳定性差。

发明内容

本发明根据R2试剂稳定性不佳，提供了一种方法来克服现有技术的不足，使得其 保持质量稳定，提供了一种灵敏度高，稳定性好的α1-微球蛋白检测试剂盒。

为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：

一种α1-微球蛋白测试剂盒，所述的试剂盒包括试剂R1、试剂R2，所述的试剂R1为缓冲 液；

所述的试剂R2是用α1-微球蛋白抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒、置于适当的缓冲液中；所 述的试剂R2是用α1-微球蛋白抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒，置于缓冲液中组成，所述试剂R2 的制备步骤包括：

步骤（1）：在带有羧基的聚苯乙烯胶乳颗粒中加入乙基二甲基胺丙基碳化二亚胺，得到 激活的胶乳颗粒；

步骤(2)：将步骤(1)激活的胶乳颗粒和α1-微球蛋白抗体混合，待反应结束后再加入葡 萄糖封闭胶乳微球上未反应的基团，得到偶联抗体的胶乳微球即α1-微球蛋白抗抗体致敏 聚苯乙烯胶乳颗粒，置于适量的缓冲液中。

作为进一步优选：所述步骤(2)中α1-微球蛋白抗抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒在试 剂R2中的浓度为0.08～0.28克/100ml。

作为进一步优选：所述试剂R1中的缓冲液为PBS缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸缓冲 液、硼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、柠檬酸-磷酸盐缓冲液、2-吗啉乙磺酸缓冲液中至少一 种。

作为进一步优选：所述试剂R2中的缓冲液为PBS缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸缓冲 液、硼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、柠檬酸-磷酸盐缓冲液、2-吗啉乙磺酸(MES)缓冲液中至 少一种。

作为进一步优选：所述步骤（1）中的聚苯乙烯胶乳颗粒其平均粒径在0.01~0.2mm 之间。

作为进一步优选：所述α1-微球蛋白抗抗体包括多克隆抗体或单克隆抗体。

作为进一步优选：步骤(1)中乙基二甲基胺丙基碳化二亚胺∶胶乳的重量比为0.5 ～5∶100。

本发明所述试剂盒所采用的检测原理为胶乳增强免疫透射比浊法，其原理是α1- 微球蛋白抗体的胶乳颗粒，与α1-微球蛋白发生免疫反应后，形成聚集颗粒，在一定波长下， 通过测定聚集物形成所产生的浊度，即可测出α1-微球蛋白的含量。

本发明的优点和有益效果：

1.本发明的试剂盒具有检测简单而快速、灵敏度高、准确性好、抗干扰能力强及生产成 本低的优点。

2.本发明采用的α1-微球蛋白检测方法为胶乳增强免疫比浊法，该方法使得α1-微 球蛋白的检测更为经济、方便和快速，适用于绝大多数医院的自动生化分析仪，特别是对急 诊能实现快速定量检测。

具体实施方式

实施例1：α1-微球蛋白检测试剂盒的制备

本发明的试剂盒涉及试剂的主要原材料如下：

1.α1-微球蛋白抗体：多克隆抗体(市售)。

2.胶乳：本发明仅示例性的采用直径为80～200nm带羧基基团的聚苯乙烯胶乳颗 粒(市售)进行实验。

本实施例的主要试剂的配制如下：