[发明专利]蛋白包载方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种医药技术领域的纳米粒制备方法，具体涉及一种蛋白包载方法。

背景技术

壳聚糖是天然存在的惟一的碱性多糖。它毒性低、可再生，具有优良的生物降解性 和生物亲和性。其分子链上有丰富的羟基和氨基，易于进行化学反应。随着高分子材料 学和药剂学的发展，壳聚糖作为一种新型制剂辅料正受到人们的普遍重视。但是壳聚糖 不溶于水和一般的有机溶剂，可溶于稀的无机酸和某些有机酸。壳聚糖只能溶于酸性溶 液的缺陷使其应用受到限制。因为酸性介质易对敏感药物的性能产生干扰，并且容易对 生物体产生毒性。使用壳聚糖季铵化的衍生物不仅保持了分子的阳离子性，还克服了壳 聚糖本身溶解性差的缺点，更加适合作为敏感药物的纳米载体。蛋白类药物药效高，针 对性强，副作用低，但同时由于蛋白类药物在体内外不稳定，十分敏感，若使用乳化聚 合法、自动乳化法等包载蛋白容易使蛋白质变性。因此，使用条件温和，操作简单的方 法制备载蛋白的纳米粒很有意义。

经过对现有技术的文献进行检索发现：中国专利公开号为CN1686560A，公开日为 2005年10月26日，专利名称为壳聚糖季铵盐纳米粒子及其制备方法和用途，该专利是 一种用作药物载体的壳聚糖季铵盐纳米粒子，其不足之处在于药物的释放量较低，造成 药物的浪费。二是未考察壳聚糖季铵盐包载药用蛋白后的粒径、载药量等参数。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是提供一种蛋白包载方法。本发明的方法 没有使用有机溶剂和有毒的交联剂，操作简单，安全可靠，成本低，制备所得的纳 米粒粒径均一，形态好。适合用于包载蛋白，制备所得的纳米粒载药量高，同时可 实现药物的缓慢和充分释放。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

第一方面，本发明涉及一种蛋白包载方法，具体为将三聚磷酸钠(TPP)溶液滴加 到含有待包载蛋白的壳聚糖季铵盐溶液中，然后对所得混合溶液离心、过滤即可。

优选地，所述待包载蛋白包括牛血清白蛋白(BSA)或重组釉原蛋白(rHAm)等。

优选地，所述三聚磷酸钠(TPP)溶液的溶剂为水，溶质三聚磷酸钠在所述溶剂中 的质量浓度为0.35～0.6mg/mL。

优选地，所述壳聚糖季铵盐溶液的溶剂为水，溶质壳聚糖季铵盐在所述溶剂中的质 量浓度为1.5～2.3mg/mL；所述壳聚糖季铵盐的分子量为50KDa，取代度为42％。

进一步优选地，所述水为超纯水。

优选地，所述三聚磷酸钠(TPP)溶液与所述壳聚糖季铵盐溶液的体积比为1:(1～ 2)。

优选地，所述滴加的速度为0.2～0.8mL/min。

优选地，所述滴加采用的设备包括恒流泵。

优选地，所述滴加完毕后需再搅拌20～40min。

优选地，所述离心的条件为4500～5000rpm、12～18min。所述离心具体采用高速离 心机。

优选地，所述过滤具体是：取离心所得上清液，通过0.22μm的滤膜过滤。用滤膜 能过滤除去大分子，实验室常用的滤膜有0.22μm和0.45μm两种。使用0.22μm的滤 膜能过滤除去更多的大分子，使粒径的PDI更小，粒径更均一，从而提高纳米粒的稳定 性。

第二方面，本发明提供一种通过所述方法获得的蛋白复合体。

第三方面，本发明提供一种含有所述蛋白复合体的制品。

与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：

(1)通过使用分子量50KDa，取代度为42％的壳聚糖季铵盐作为载体，使得制备所 得的纳米粒粒径均一，载药量和包封率更高，药物释放量更多；

(2)通过用高速离心机离心、0.22μm的滤膜过滤，使得制备所得的纳米粒粒径均 一，PDI在0.16～0.31范围内，纳米粒的稳定性更高；

(3)通过使用本发明所述的制备方法和浓度比，使得载药纳米粒的药物释放量高， 释放速度快，50小时即可释放药物40～100％。

附图说明

通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特 征、目的和优点将会变得更明显：

图1为纳米粒的扫描电镜图；

其中，(a)是空白纳米粒，(b)为载BSA纳米粒；(c)为载rHAm纳米粒；