[发明专利]一种猪链球菌截短蛋白Sao及应用

说明书

本发明公开了一种猪链球菌截短蛋白Sao及应用，所述的截短蛋白Sao其氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示。该蛋白稳定性优于全长蛋白，不容易降解，利用本发明提供的Sao蛋白制成疫苗后，可有效对仔猪产生保护作用；利用大剂量的强毒株SC19攻毒后，其保护力依然达到60%。Sao蛋白安全无毒，对仔猪及妊娠母猪免疫后整个观察期间体温、呼吸、食欲、精神状态都正常，妊娠猪产仔正常，没有出现流产、死胎等情况。Sao蛋白还可与其他蛋白联合制备成多联疫苗，适用于大量生产。

技术领域

本发明涉及家畜基因工程疫苗领域，具体涉及一种猪链球菌截短蛋白Sao及应用。

技术背景

猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)是引起猪链球菌病的主要病原，依据细菌表面的荚膜多糖(CPS)可以将S.suis分为33个血清型，分别为1/2型、1～31和33型。其中猪链球菌2(SS2)型是毒力最强、流行广、临床分离频率最高的血清型。SS2是一种重要的人畜共患病病原体，能引起猪脑膜炎、心内膜炎、败血症、关节炎、浆膜炎、肺炎等，常引起断奶仔猪或育肥猪突然死亡；人类感染该菌，可导致脑膜炎，引发永久性耳聋、败血症、心内膜炎，甚至死亡。1991年首次报道在广东省发现猪2型链球菌疑似病例,1998-1999年江苏省部分地区连续2年在盛夏季节暴发该病。目前已有足够的流行病学资料证实，SS2已经对我国的养殖业和人民健康构成了严重的威胁。因此，研发出有效的疫苗来预防猪链球菌的感染和控制猪链球菌病迫在眉睫。

亚单位苗具有活菌苗的免疫效力高及灭活菌苗的安全性好等优点，Yuanyi Li等人证实Sao是猪链球菌的表面膜蛋白，Sao的特异性抗体可以和33个血清型中的28个血清型菌株裂解物及26株SS2中的25株有良好的免疫原性反应，说明Sao在猪链球菌中有高保守性。

另外，Sao蛋白的免疫保护效果和佐剂有很大关系。Yuanyi Li等人发现Sao和佐剂Emulsigen-Plus混合使用后虽然能引起较高的抗体水平，但是不能保护仔猪抵抗猪链球菌的感染。该研究者后来将佐剂Emulsigen-Plus替换成佐剂Quil A，却能提供仔猪80％以上的保护力。K.-J.Hsueh等人证实Sao和商业化佐剂w/o/w佐剂也能给鼠提供80％的保护力。

Sao根据基因序列长度的不同分为3个型：Sao-S(1.5kb)、Sao-M(1.7kb)、Sao-L(2.0kb)，其中Sao-M在菌株中分布最广。Sao-M全长蛋白有110KD，王晶等人发现全长sao蛋白纯化难度大，蛋白稳定性差，降解速度块，这些因素阻碍了Sao蛋白疫苗的进一步研发。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种猪链球菌截短蛋白Sao，其序列为SEQ ID NO.2所示。本发明提供的截短蛋白Sao为稳定性蛋白，溶解于PBS缓冲溶液中，保存在-80℃一个月后取出未发现蛋白有降解现象。

本发明的另一个目的在于提供了猪链球菌截短蛋白Sao在制备猪链球菌感染疫苗中的应用，将截短蛋白Sao和佐剂制备成疫苗，肌肉免疫仔猪，加强免疫后攻毒，可以给仔猪提供较高的保护力。

本发明最后一个目的在于提供了截短蛋白Sao在制备多联疫苗中的应用，将本发明提供的截短蛋白Sao与其他蛋白疫苗制备成多联疫苗，可起到一针多效的效果。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

全长蛋白Sao不稳定，容易降解，申请人将全长Sao蛋白进行有效的截短，截短后的蛋白序列为SEQ ID NO.2所示，截短蛋白Sao变为稳定性蛋白，溶解于PBS缓冲溶液中，保存在-80℃一个月后取出未发现蛋白有降解现象。

猪链球菌截短蛋白Sao在制备猪链球菌感染疫苗中的应用，包括将截短蛋白Sao和佐剂按比例混合制备成疫苗，肌肉免疫仔猪，能有效保护仔猪抵抗猪链球菌的感染。