[发明专利]一种带位置可调的多孔隔膜的密度梯度离心管及其应用

说明书

技术领域

本发明具体涉及一种带位置可调的多孔隔膜的密度梯度离心管及其应用，主要适用于分离人或动物体液中的白细胞、红细胞、淋巴细胞、干细胞以及医疗诊断领域的循环肿瘤细胞。

背景技术

随着生物技术的快速发展，密度梯度离心技术成为了细胞分离与富集的常用生物技术方法，广泛应用于细胞生物学研究、细胞的再培养，尤其最近细胞治疗技术和循环肿瘤细胞在临床诊断和治疗领域应用的崛起，使得密度梯度离心技术走出了实验室。

密度梯度离心是用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或体液置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使混合样品穿过密度梯度层的沉降或上浮来达到细胞分层、分离。这类分离又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种，利用这种现象可以分离体液中需要获取的具有特定密度的细胞。

而传统的密度梯度离心存在如下缺陷：1、进行将样本放置在分离液液面上操作时，很容易出现样本预混到分离液中的现象，而发生预混会使分离效果大打折扣；2、密度梯度离心时由于离心机晃动的造成不同细胞层间的相互污染，降低细胞纯度和回收率；3、离心完成后取样时由于各层细胞间没有物理隔断，容易误吸其它层的细胞，而操作造成的扰动也会干扰试验结果；4、黏附在试管壁上的目的细胞无法通过清洗的方式回收。

为了克服传统方式的缺陷，现在有设计带多孔隔膜的离心管来进行密度梯度离心分离，然而现有市场上的这种产品，它们的多孔隔膜层是固定的，使得分离液的容积不能根据不同实验要求做出调整，影响了实验的最佳结果，且适用范围比较窄。

发明内容

本发明的目的是克服现有每个离心管所能装的分离液体积固定，不可调整，适用范围窄的问题。

为此，本发明提供了一种带位置可调的多孔隔膜的密度梯度离心管，包括离心管本体，所述离心管本体上端设有离心管盖,所述离心管本体内设有隔膜层,离心管本体内壁上设有内螺纹，隔膜层外壁上设有外螺纹，离心管本体的内螺纹与隔膜层的外螺纹相配合，所述隔膜层上设有多个小孔。

进一步地，上述离心管本体上端外壁设有外螺纹，离心管盖内壁设有内螺纹，离心管本体的外螺纹与离心管盖的内螺纹相配合。

进一步地，上述内螺纹的凸面为弧形结构。

进一步地，上述隔膜层调节离心管本体下腔体积为10～20ml。

进一步地，上述小孔的孔径为0.5～0.8mm。

进一步地，上述隔膜层采用树脂颗粒热压制而成。

进一步地，上述隔膜层厚度为3mm。

进一步地，上述隔膜层设有配套的辅助塑料棒，辅助塑料棒包括下部的插板、上部的手柄以及中间的连接杆，隔膜层上设有插缝，辅助塑料棒下部的插板与插缝相配合，辅助塑料棒上部的手柄伸出离心管本体。

另外，本发明还提供了上述带多孔隔膜位置可调的密度梯度离心管的应用，具体包括如下步骤：

1)取无菌的该离心管本体，向其中加入设计量的分离液。

2)向离心管本体中放入隔膜层，通过隔膜层外螺纹与离心管本体的内螺纹相配合，旋扭调整隔膜层位置至隔膜层下部与分离液水平。

3)将待分离的样品加入到隔膜层上层，离心管本体盖紧离心管盖。

4)将步骤3)中装有待分离样品的离心管本体进行离心。

5)离心完成后，倒出隔膜层上层的样品至另一新离心管中。

6)用洗液清洗离心管本体的隔膜层上层，取出洗液至步骤5)中的新离心管中。

7)将新离心管中的样品进行离心，去上清液，得到目的组份。

具体地，上述步骤2)中隔膜层的位置调整通过辅助塑料棒完成，隔膜层上表面中心开设插缝，辅助塑料棒下端插入插缝中，旋转辅助塑料棒调节隔膜层的位置。

本发明的有益效果：

(1)本发明提供的这种带位置可调的多孔隔膜的密度梯度离心管设置隔膜层，有效避免离心前待分离样本与离心管中分离液的预混合，以及离心后分离到隔膜层下端的组分回流到隔膜层上层造成上层组分的污染，提高试验成功率和分离效果。

(2)本发明提供的这种带位置可调的多孔隔膜的密度梯度离心管设置的隔膜层位置可通过旋钮移动来调节隔膜层下端的不同容积，以使该离心管适应不同样本要求的分离，提高了离心管的使用灵活性，可以分离较小量的样品。

(3)本发明提供的这种带位置可调的多孔隔膜的密度梯度离心管操作简单，结构简洁无死角，细胞回收率高。

以下将结合附图对本发明做进一步详细说明。

附图说明