[发明专利]检测血小板衍生长因子的荧光增强微阵列传感器

权利要求书

1.一种检测血小板衍生长因子的荧光增强微阵列传感器，其特征在于基底为功能化的贵金属纳米颗粒-聚二甲基硅氧烷(PDMS)混杂膜，混杂膜表面经胺基化修饰及表面包覆厚度为n层的聚赖氨酸和聚丙烯酸涂层，以聚丙烯酸作为开始层，涂层厚度n为1～10层，贵金属纳米颗粒为金或银纳米颗粒，金属纳米颗粒直径为20～100nm，所述的微阵列传感器建立在96孔板或者384孔板孔道内，孔管容积为100～400μL，空管材质为聚烯烃。

2.一种制备检测血小板衍生长因子的荧光增强微阵列传感器的方法，其特征在于由原始96孔板或者384孔板孔内原位合成的金属纳米颗粒-聚二甲基硅氧烷(PDMS)混杂膜表面胺基化修饰及表面涂层、结合能够捕获血小板衍生长因子的适配体所得，按以下步骤进行：

(1)混杂膜表面胺基化修饰及表面涂层：在制得的贵金属纳米颗粒-聚二甲基硅氧烷(PDMS)混杂膜孔道中加入50～200μL巯基乙胺的乙醇溶液，在5～40℃下反应10～48小时，巯基乙胺溶液浓度为1mM～10mM，然后用无水乙醇冲洗，再换成去离子水冲洗，在20～60℃下烘干，然后在此膜表面包覆厚度为n层的聚赖氨酸和聚丙烯酸涂层，以聚丙烯酸作为开始层，涂层厚度n为1～10层，具体做法如下：在膜表面首先加入50～200μL的聚丙烯酸水溶液，聚丙烯酸水溶液的质量浓度为1mg/ml～10mg/ml，在5～40℃条件下反应5～60分钟，然后用去离子水洗涤以及在10～40℃条件下干燥；接着在此表面再加入50～200μL的聚赖氨酸水溶液，聚赖氨酸水溶液的质量浓度为：1mg/ml～10mg/ml，在5～40℃条件下反应5～60分钟，然后用去离子水洗涤以及在10～40℃条件下干燥，这样就形成一层聚赖氨酸和聚丙烯酸涂层，按照相同的方法就可以制备得到n层聚赖氨酸和聚丙烯酸涂层；

(2)结合能够捕获血小板衍生长因子的适配体：在步骤(1)修饰后的金属纳米颗粒混杂膜孔道中加入50～200μL适配体水溶液，适配体序列为5′TAMRA-CAG GCT ACG GCA CGT AGAGCA TCA CCA TGA TCC TG-3′，其中TAMRA为结合在适配体上的有机荧光分子，适配体水溶液浓度为100nM～1000nM，在30～90℃条件下反应30～120min，反应完成后剩余的溶液用移液器吸取，然后用pH7.4的PBS缓冲溶液洗涤3～6次。

3.根据权利要求2的方法制备的微阵列传感器检测血小板衍生长因子含量的方法，使用不同浓度的血小板衍生长因子样品溶液50～200μL加入所述的荧光增强微阵列传感器孔道内，在20～50℃条件下孵育30～120分钟，然后用移液器吸取未反应掉的溶液，加入50～200μLpH7.4的PBS缓冲溶液轻轻地洗涤，吸取洗涤液，最后用荧光酶标仪定量。