[发明专利]一种适用于现场检测的可卡因快速定量检测方法

说明书

本发明公开一种适用于现场检测的可卡因快速定量检测方法，包括以下步骤：(1)制备纸基检测装置：选取纸张作为检测基底，以疏水壁垒在纸张表面圈定亲水检测区域，共价偶联水溶性上转换荧光纳米材料和适配体ACA‑1；(2)选取金纳米颗粒并在其表面修饰适配体ACA‑2，得到AuNPs‑ACA‑2溶液；(3)AuNPs‑ACA‑2溶液的浓度优化；(4)配制可卡因的标准溶液；(5)绘制可卡因检测标准曲线；(6)待测体液中可卡因浓度的测定。本发明解决了可卡因检测领域亟待解决的快速定量检测的问题，实现了体液样品中可卡因浓度的快速、定量、高灵敏检测，定量检测灵敏度可达0.05μM。

技术领域

本发明属于可卡因快速定量检测技术领域，具体涉及一种基于上转换荧光纳米材料的快速、定量、高灵敏检测可卡因的纸基检测方法。

背景技术

毒品滥用是目前危害人类最严重的社会问题之一，可卡因是各类毒品中应用最广泛的一种。可卡因滥用会对人体产生很大威胁，使得人类心率加快，呼吸急促，甚至出现震颤、痉挛、惊厥等现象，对人类安全、社会稳定和世界和平构成巨大威胁。因此，研究新型、灵敏、定量的可卡因检测方法对于禁毒、毒物检测、刑事鉴定等具有非常重要的实践意义和应用价值。

目前已报道的传统可卡因检测方法有：光学分析法、电化学分析法、高效毛细管电泳法、核磁共振光谱法等，这些传统检测方法存在检测灵敏度不够、操作复杂耗时、依赖精密贵重仪器、需专业人员进行操作等缺点，常常不能满足研究分析和临床检测的要求。以单克隆抗体为基础的现场快速检测毒品方法应用最为广泛，但该类方法存在一定的局限性，如抗体自身缺陷、抗体制备工作量大、不同来源抗体的非特异性结合产生假阳性信号等。近年来，以核酸适配体为基础的毒品现场快速检测方法得到一定发展，基于核酸适配体的检测方法特异性好，灵敏度相对于抗体检测更高，但目大多数还局限于实验室研究阶段，不适宜用于现场检测。

综上所述，本领域尚缺乏令人满意的适用于现场检测的可卡因快速定量检测方法，因此，迫切需要研制开发具有灵敏、快速、准确、特异性好等优点的可卡因现场检测技术。

发明内容

本发明所要解决的技术问题为克服现有技术的不足，提供种一种适用于现场检测的可卡因快速定量检测方法，可以直接获得可卡因定量检测结果，无需二次检测。

本发明为解决上述技术问题提供的技术方案为：

一种适用于现场检测的可卡因快速定量检测方法，包括以下步骤：

(1)制备纸基检测装置：选取纸张作为检测基底，以非水溶性溶剂作为疏水壁垒在纸张表面圈定亲水检测区域，将水溶性上转换荧光纳米材料和单链核酸适配体ACA-1共价偶联在所述亲水检测区域，得到纸基检测装置；

(2)选取金纳米颗粒(AuNPs)并在其表面标记单链核酸适配体ACA-2，所得产物记作AuNPs-ACA-2，将其分散于缓冲液中，得到AuNPs-ACA-2溶液；

(3)AuNPs-ACA-2溶液的浓度优化：分别在步骤(1)所述的纸基检测装置的亲水检测区域中加入体积为V1固定浓度的可卡因溶液和体积为V2不同浓度的AuNPs-ACA-2溶液，反应完成后除去未反应的AuNPs-ACA-2；将所得反应后的纸基检测装置干燥后用980nm激光光源激发，于黑暗条件下拍摄亲水检测区域的荧光图像并用软件读取荧光图像中绿光强度F；设定AuNPs-ACA-2溶液的浓度为0时，所得绿光强度空白样强度记为F₀，计算不同浓度AuNPs-ACA-2溶液所对应的荧光猝灭效率(F₀-F)/F₀，得到荧光猝灭效率最大时所对应的AuNPs-ACA-2溶液浓度C；

(4)配制可卡因的标准溶液：用体液配制不同浓度的可卡因溶液，即为可卡因标准溶液；