[发明专利]一种单纯疱疹病毒感染树鼩动物模型的构建、评估方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种HSV感染树鼩动物模型的构建、评估方法及其应用， 属于人类疾病动物模型技术领域。

技术背景

单纯疱疹病毒(HerpesSimplexVirus,HSV)：是人类最常见的病原体， 世界人口中超过80％的人都感染过HSV，一旦感染则终身潜伏。可引起 口唇疱疹、角膜炎、疱疹病毒性脑炎和生殖器疱疹。HSV能引起人类多 种疾病，如龈口炎(gingivostomatitis)、角膜结膜炎(keratoconjunctivitis)、 脑炎(encephalitis)以及生殖系统感染和新生儿的感染。在感染宿主后， 常在神经细胞中建立潜伏感染，激活后又会出现无症状的排毒，在人群中 维持传播链，周而复始的循环。

目前，啮齿类是研究疱疹病毒潜伏感染的主要实验动物，啮齿类的小 鼠和家兔模型中已有HSV经眼睛接种感染的报道，但由于啮齿类与灵长 类差距甚远，并不能完整地模拟人类疱疹病毒感染的情况。通常HSV-1 经眼睛接种途径感染小鼠后，病毒会在小鼠的三叉神经节和中枢神经系统 发生裂解感染，在神经元内大量复制，导致被感染的神经元死亡，引起动 物大量死亡；然而，我们知道人类感染疱疹或病毒再激活时，并没有在疱 疹组织部位失去知觉，表明在人类感觉神经中枢(包括三叉神经节)不存 在神经元死亡，这是啮齿类模型无法解释的现象。此外，小鼠模型缺乏对 病毒的临床再激活能力，家兔模型与人类感染的免疫反应差异较大，且家 兔实验成本高。因此，建立一个与人类或灵长类更接近的动物模型，来研 究单纯疱疹病毒潜伏感染机制显得尤为重要。

树鼩(Tupaiabelangeri)在分类学上属哺乳纲，有胎盘类，是一个独立 的目，称为攀鼩目(Scandentia)，介于灵长目与食虫目之间。树鼩具有体型 小，易饲养和操作，管理方便，廉价经济，且其进化程度高，新陈代谢和 大体解剖比犬、大小鼠等动物与人更为接近，解剖结构也更近似于人，因 此其作为较理想的实验动物，已经被广泛地应用于医学与生物学的研究中。

虽然19世纪七八十年代，Darai,Schwaier等已经有关于HSV腹腔感 染树鼩的报道，但目前尚未见关于树鼩HSV潜伏感染模型的深入研究报 道。建立最接近于人类的灵长类动物HSV感染模型，可以评估目前这些 治疗方法的有效性和安全性，是将其最终应用于临床治疗的必经途径。

发明内容

鉴于现在对HSV病毒感染实验动物模型开发的需求，本发明拟设计 一种HSV病毒感染模型的建立及评估方法，通过单纯疱疹病毒经眼睛接 种感染树鼩，建立HSV感染树鼩模型，为研究疱疹类病毒的感染机制， 致病机理及药物治疗研究提供更好的实验动物模型。

本发明的技术方案：一种单纯疱疹感染树鼩动物模型的构建方法是将 HSV-1病毒经树鼩眼睛接种感染HSV病毒，建立单纯疱疹感染树鼩动物 模型，包括以下步骤：

(1)实验动物准备：准备6月-3岁龄雌性成年健康树鼩；

(2)树鼩的麻醉及处理：用氯胺酮麻醉动物，将树鼩固定于专用的 小布袋中，称量并记录其体重，在树鼩大腿内侧肌肉丰厚处注射盐酸氯胺 酮，5分钟后，树鼩处于麻醉状态；

(3)病毒感染：将HSV-1病毒滴加到树鼩两只眼膜上，即可得到单 纯疱疹感染树鼩动物模型。

其中，步骤(3)中所述的HSV病毒为野生型HSV-117⁺或HSV-1 McKrae毒株。

进一步地，步骤(2)中所述的氯胺酮(ketamine)的用量为按树鼩 体重为50mg/kg～100mg/kg。

进一步地，步骤(3)中当采用HSV-117⁺病毒时，需要以1ml注射 器针头划痕动物眼膜，即建立表面划痕，横竖各划痕十次，然后将HSV-1 17⁺病毒滴加到树鼩眼膜。

进一步地，步骤(3)中采用的病毒感染剂量为1×10⁴PFU/眼睛～1×10⁶PFU/眼睛。