[发明专利]一种新型荧光脂质体纳米探针及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于纳米技术和荧光诊断研究领域，特别涉及一种新型荧光脂质体纳米探针及其 制备方法。

背景技术

荧光量子点(quantumdots，QDs)也称为半导体纳米晶体(semiconductornanocrystal)， 是指在三维空间上达到一定临界尺寸(激子波尔半径)而具有量子限域效应的球形半导体材 料，其粒径一般为2～10nm(2000～10000个原子)。通常有元素周期表的Ⅱ-Ⅵ或Ⅲ-Ⅴ族元 素组成，目前研究较多的主要是CdX(X＝S，Se，Te)材料。荧光量子点作为一种新型的无机 荧光探针，具有许多独特的性质，能有效地克服有机荧光染料和荧光蛋白的一些致命弱点。 主要表现为：(1)荧光量子点的激发光谱较宽且连续分布而且发射光谱较窄且对称分布，通 常半峰宽为25～35nm，发射波长均可覆盖范围广(400nm～1350nm)；(2)荧光量子点的发射 波长可通过改变量子点的大小而加以调节，而其组成和表面性质无需改变。因此，可将不同 大小的荧光量子点用单一波长的光激发而发射出不同颜色的荧光，从而实现一种材料的多色 标记和多组分检测。而传统的荧光染料随着材料的不同，需要多种激发光激发，这样累积的 能量很容易使受试样品特别是生物样品遭到破坏，而且由于其发射光谱宽，重叠现象重，因 此难以实现多色标记和多组分检测；(3)荧光效率较高。(4)荧光量子点的光稳定性特别好， 特别是核壳型荧光量子点，较传统的有机染料分子强数个数量级，而通过改进的表面修饰工 艺还可进一步提高其光稳定性。(5)荧光量子点具有较长的荧光寿命(一般为20～50ns)， 使得信号可以显著区别于背景和其他荧光基团，提高检测灵敏度。

叶酸(Folicacid)，是许多肿瘤组织生长必不可少的一种营养成分，为了比正常组织更 快地生长，肿瘤细胞往往需要较正常细胞摄取更多的叶酸，因而许多肿瘤细胞(如卵巢癌、 绒毛膜癌、以及乳腺、肺、肾、直肠肿瘤等)表面的叶酸受体表达十分丰富，叶酸受体在正 常组织中很少或几乎不表达。近年来的研究认为，利用叶酸-叶酸受体之间能特异性结合的特 性，将某些物质与叶酸结合，可以实现肿瘤靶向作用。

脂质体(liposome)，是结构类似生物膜的封闭型超微球体，骨架结构由磷脂双分子层构 成的亲水性囊泡，这种结构使其能够携带各种亲水的、疏水的和两亲的物质。脂质体具有有 效防止被包裹药物氧化、提高其稳定性和生物利用度、使被包裹药物具有靶向性、天然无毒、 生物可降解、无免疫抑制作用等优点。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种具有荧光性能、靶向性、稳定性好且生物相容性高 的新型荧光脂质体纳米探针。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案为一种新型荧光脂质体纳米探针，该荧光脂 质体纳米探针包含水溶性CdTe量子点、二棕榈酰磷脂酰胆碱、胆固醇、聚乙二醇-二硬脂酰 基磷脂酰乙醇胺和叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺。

作为优选，所述二棕榈酰磷脂酰胆碱、胆固醇、聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺与叶 酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺的重量混合比例为75～85:10～20:4～5:0.5～1。

作为优选，所述二棕榈酰磷脂酰胆碱、胆固醇、聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺与叶 酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺的重量混合比例为80:15:4.5:0.5。

作为优选，所述的水溶性CdTe量子点的制备方法包括以下步骤：取Te粉0.1276g，加 入0.15723gNaBH₄，加入5mL超纯水，通高纯N₂反应得到无色的无氧NaHTe溶液备用；将 0.4566gCdCl₂·2.5H₂O溶于30mL蒸馏水中，加入350μL巯基丙酸，用0.1mol/LNaOH溶液 调节pH值为12，然后用高纯N₂在密闭体系中进行脱氧保护，加入200μL所述的无氧NaHTe 溶液，将反应液加热至96℃回流1h。

作为优选，所述的叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺的制备方法包括以下步骤： 将62.5mg叶酸与10mLDMSO置于反应瓶中反应，加入250mgDSPE-PEG-NH₂和250μL吡 啶，在81.5mgDCC的催化下得到反应液，通过旋转蒸发除掉吡啶，再加入31.25mL超纯水 通过透析、微孔滤膜过滤，冷冻干燥。