[发明专利]人源抗狂犬病毒糖蛋白中和性抗体RV3A5及其应用

说明书

本发明公开了一种人源抗狂犬病毒糖蛋白中和性抗体RV3A5，该抗体运用噬菌体抗体库技术筛选获得。本发明的抗体特异性识别狂犬病毒颗粒抗原，且均针对狂犬病毒糖蛋白G，与狂犬病毒具有明显的免疫荧光反应和酶联免疫反应，具有抗狂犬病毒感染的中和活性功能。可将本发明抗体制成预防和治疗狂犬病的特异性抗体药物，从而可在临床上用于预防和治疗由狂犬病毒引起的狂犬病。

技术领域

本发明涉及基因工程抗体技术，特别是涉及人源抗狂犬病毒糖蛋白中和性抗体RV3A5及其应用。

背景技术

狂犬病是由狂犬病毒引起的世界性人兽共患病，一旦发病100％死亡。目前世界上87个国家有狂犬病报道,每年约有5万多人死于狂犬病(Knobel DL,et al.2005)。狂犬病暴露后预防是防治狂犬病的主要措施。对于严重暴露的人，世界卫生组织(World HealthOrganization,WHO)建议采用狂犬疫苗注射结合抗狂犬病毒免疫球蛋白(rabies immuneglobulin，RIG)的方法。目前使用的两类RIG为人抗狂犬病毒免疫球蛋白(human rabiesimmune globulin，HRIG)和马抗狂犬病毒免疫球蛋白(Equine rabies immune globulin，ERIG)。由于ERIG副反应比较严重，而且对某些疫苗的抗体反应有抑制，而HRIG价格昂贵，供应量有限并且有潜在的病原威胁。因此制备高效、价廉、副反应小的被动免疫制剂成为新的研发目标。

含有特异性抗体的人源或动物血清免疫球蛋白用以预防和治疗传染病已历史悠久。单克隆抗体的体外抗病毒中和活性和体内保护肌体抵抗病毒攻击已获得许多实验证明，如鼠抗甲肝病毒、汉坦病毒、麻疹病毒、RSV病毒、CMV病毒等中和性单克隆抗体可以在体内100％保护动物免受病毒攻击。以抗原免疫动物获得多抗血清的途径一直是获得抗体的经典方法，但缺乏特异性和均一性。继而建立的B淋巴细胞杂交瘤技术使得众多科学家通过细胞工程可以在体外定向地制备各种单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb)，其特异性强，性质均一，易于大量生产。然而McAb多为鼠源性，鼠源McAb的异源性反应极大地限制了McAb作为治疗制剂在人体的应用。免疫球蛋白(Vaccinia immune globulin,VIG)作为抗体成分主要来自捐献者(恢复期病人)免疫血清，从获得阳性血清到通过安全性检测均需花费大量的人力和财力，这就使其大量制备受到限制，同时由于来源于血清因此容易发生血源性传播疾病的感染。因此使用人源基因工程产品替代血制品则可克服这些缺陷，随着人源基因工程抗体研究的不断深入，给这一领域的生物制品发展带来了新的希望和广阔前景。通过抗体分子基因水平的重组可获得多种多样的特异性鼠源及人源抗体，使对单克隆抗体的研究有了突破性进展并越来越显示出其重要意义及实际运用前景。人源抗狂犬病毒单克隆抗体的研制和噬菌体抗体库技术的产生为解决被动免疫制剂问题提供了新的思路。狂犬单克隆抗体CR57和CR4098制成的单克隆抗体鸡尾酒中和了26种典型的街毒株。对动物的保护性实验表明，利用单克隆抗体鸡尾酒进行治疗具有可行性和优越性(Goudsmit J,etal.2006)。

上世纪80年代末90年代初兴起的噬菌体抗体库技术兴起和整个基因工程抗体技术研究领域的发展，使当今世界人源或基因工程抗体的开发研究取得很大进展并已由基础研究阶段步入实质性应用研究和开发阶段。人源抗病毒基因工程抗体，尤其是人源全抗体的研究成功，给各种病毒性传染病的特异性预防和治疗带来了新的希望，在抗病毒感染生物药领域逐渐形成了一类新的抗病毒药，即所谓的抗体药(Antibody Drug)。如同当初血源性疫苗向基因工程疫苗的转变，现在也急需用基因工程抗体替代血源性VIG，如通过嵌合抗体技术(Boulianne,G.L.et al.,1984；Morrison,S.L.et al.,1984)、人源化抗体技术(Jones,P.T.et al.,1986)、携带人单抗的转基因小鼠技术(Green,L.L.et al.,1994)、异体杂交瘤技术(James,K.et al.,1987)、噬菌体表面展示技术(Barbas,C.F.et al.,1991)等产生人源化抗体，已成为国内外研究的重大方向，并逐步走向成功。

发明内容