[发明专利]一种猪伪狂犬病毒的抑制细胞系

说明书

本发明提供了一种猪伪狂犬病毒的抑制细胞系，可用于制备无伪狂犬病毒感染的细胞或动物模型，同时提供了相应的制备方法，制备的猪伪狂犬病毒的抑制细胞系含有Cas9核酸内切酶系统和靶向PRV的UL30基因的sgRNA。该细胞对PRV的感染具有显著的抑制作用。可用于制备无伪狂犬病毒感染的细胞或动物模型，在临床、实验室研究上具有广阔的应用前景。

技术领域：

本发明提供了一种猪伪狂犬病毒的抑制细胞系，可用于制备无伪狂犬病毒感染的细胞或动物模型，同时提供了相应的制备方法，属于细胞生物学技术领域。

背景技术：

伪狂犬病毒（Pseudorabies virus，PRV）是发生于家猪和野猪的病毒病，在世界上的大部分地区呈地方性流行。牛、羊、猫、狗等家畜和野生哺乳动物都是易感染动物。另外，有文献报道，该病毒还可以感染人类。

PRV属于疱诊病毒科，与感染人类的单纯疱疹病毒（HSV）亲缘关系较近。该病毒的UL30基因编码DNA复制酶亚基，且其基因序列在疱诊病毒科的病毒中保守性较强。因此，UL30基因可以作为疱诊病毒科病毒的预防及治疗的靶基因。另外，目前国内外关于猪伪狂犬病毒的抑制细胞系的研究尚没有报道。

发明内容：

本发明公开了一种猪伪狂犬病毒的抑制细胞系，该细胞可以显著抑制伪狂犬病毒的感染，可用于制备无伪狂犬病毒感染的细胞或动物模型；

本发明还提供了猪伪狂犬病毒的抑制细胞系的制备方法，适用于人工制备该细胞系；

本发明提供的一种猪伪狂犬病毒的抑制细胞系，其特征在于：

该细胞含有Cas9核酸内切酶系统和靶向PRV的UL30基因的sgRNA；该细胞感染PRV后，该sgRNA可以特异结合到UL30基因的特定位点上，并准确地引导细胞内的Cas9核酸内切酶系统将UL30基因特异切断，导致UL30基因不能表达，从而达到抑制病毒复制的目的；

本发明公开了一种真核表达载体PX459-PRV，用于构建上述的猪伪狂犬病毒抑制细胞系；

本发明构建的真核表达载体PX459-PRV是在PX459载体的基础上，插入人工合成的DNA片段而成；

本发明公开的PX459-PRV上插入的人工合成的DNA片段可以在细胞内转录为sgRNA，且该sgRNA可以特异地与PRV的UL30基因的特定位点结合；

本发明公开的人工合成的DNA序列为：

sgPRV-F3：5-caccgtgccgccgcagtagaccgt-3,

sgPRV-R3：5-aaacacggtctactgcggcggcac-3；

本发明所述猪伪狂犬病毒的抑制细胞系的制备方法，包括以下步骤：

1. 人工合成DNA片段

sgPRV-F3：5-caccgtgccgccgcagtagaccgt-3,

sgPRV-R3：5-aaacacggtctactgcggcggcac-3；

2. 真核表达载体PX459-PRV的构建

将上述合成的DNA片段经过退火后，连接到真核表达载体PX459的相应酶切位点上，构建成真核表达载体PX459-PRV；

3. 猪伪狂犬病毒抑制细胞系的建立