[发明专利]免疫力形成

说明书

一种制备药物的改善的方法，该方法包括使用昆虫的组织、幼虫形式或衍生物，该昆虫已经饲喂含有病原体的食物。

技术领域

本发明涉及免疫力形成。

在英国专利说明书号2 368 016中，描述了一种制备药物的方法，该方法包括使用昆虫的组织、幼虫形式或衍生物，该昆虫已经饲喂含有病原体的食物。以下将该方法称为“所定义的方法”，并导致以下称为AMP的抗微生物肽的表达。

本发明的目的是提供所定义的方法的改善。

发明内容

根据本发明的第一方面，提供了所定义的方法，所述方法通过选择性地改变所使用的病原体的数量或性质来调节(最大化)AMP的表达。

当应用于用细菌喂养幼虫，已经发现用不同剂量的细菌最大程度地刺激不同的AMP。因此，有利于高剂量的双翅杀菌肽(Diptericin)的表达和低剂量的麻蝇防卫素(Sapecin)的表达。

迄今为止发现的最佳细菌/幼虫组合是由丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)刺激的丝光绿蝇，丁香假单胞菌是对人类或其他动物不致病的并且在环境中发现的细菌。

因此，根据本发明的第二方面，提供了所定义的方法，所述方法包括通过丁香假单胞菌刺激丝光绿蝇(Lucilia sericata)。

已发现暴露于该细菌12小时的4日龄的幼虫，与未受刺激的幼虫相比，AMP表达增加至30倍。可以用活的或死的细菌刺激幼虫，而不会影响幼虫饲料消耗或最终重量。

附图说明

图1显示被饲喂含有黄豆、未受刺激的幼虫(未受刺激的)或受刺激的幼虫(受刺激的)的饮食的小鸡盲肠中的弯曲杆菌的数目。条形图指示组间显著差异。

图2显示被饲喂含有黄豆、未受刺激的幼虫(未受刺激的)或受刺激的幼虫(受刺激的)的饮食的小鸡盲肠中的乳酸菌的数目。组间未见显著差异。

图3显示被饲喂含有黄豆、未受刺激的幼虫(未受刺激的)或受刺激的幼虫(受刺激的)的饮食的小鸡盲肠中的肠道菌的数目。组间未见显著差异。

图4显示被饲喂对照或未受刺激的幼虫或受刺激的幼虫饮食的小鸡盲肠扁桃体中没食子酸甲酯11表达的中位水平。星号表示使用Dunn's事后检测的显着差异。

具体实施方式

1日龄的Ross肉仔鸡被安置在生物安全设施中，并且饲喂市售的小鸡面包屑，其中含有10％的黄豆粉、粉碎的未受刺激的绿蝇幼虫，或粉碎的未受刺激的绿蝇幼虫。

从该培养基中取出在奶粉/蔗糖/小麦胚芽/琼脂混合物中饲养4天的昆虫幼虫并洗涤。然后将它们引入新鲜的生长培养基中，该生长培养基中未添加细菌(未受刺激的)或含有每克约5×10⁷丁香假单胞菌(受刺激的)。在该培养基上培养24小时后，除去幼虫，洗涤以除去所有痕量的生长培养基并冷冻干燥。一旦干燥，就用研杵和研钵粉碎，得到粗粉，添加到小鸡面包屑中。

三日龄时，用10⁵cfu空肠弯曲杆菌菌株M1口服感染小鸡。

八日龄时，将小鸡安乐死，并通过连续稀释并分别在mCCDA、MRS和VRBG琼脂上铺板，去除了盲肠并检验弯曲杆菌、乳酸菌和肠道菌。使用克鲁斯卡尔-沃利斯检验分析了小鸡中发现的细菌水平的差异，P0.05的Dunn's事后检测被认为是显着的。

含有受刺激的幼虫的饲料的使用导致盲肠中弯曲杆菌的减少(图1)；在乳酸菌或肠道菌的数目上没有影响(图2和图3)。

在定殖方面，8天后，13％的黄豆饲喂的小鸡对盲肠弯曲杆菌呈阴性，18％的未受刺激的幼虫饲喂的小鸡以及41％的受刺激的幼虫饲喂的小鸡对盲肠弯曲杆菌呈阴性。与含黄豆的对照相比，含有受刺激的幼虫的饲料导致有盲肠弯曲杆菌定殖的小鸡的数目显著减少(P0.05)。