[发明专利]用在凝固测定中的鞣花酸制剂

说明书

优先权声明

本申请要求2014年9月26日提交的美国临时申请号62/055,768的优先权，其整个内容通过引用并入本文。

技术领域

本发明涉及鞣花酸制剂，且具体地，涉及在试验装置中使用鞣花酸制剂进行凝固测定。

背景技术

血液凝固或止血是身体的一种重要保护机制，用于封闭由对身体的损伤造成的创伤。止血以两个阶段发生。初步(细胞的)止血用于快速地停止出血和使失血最小化。初步止血涉及内皮的受损细胞和下面的细胞层，其发出信号使血小板(凝血细胞)能够积累在受损血管区域中，从而形成暂时封闭创伤的栓。次级(血浆的)止血或凝固与初步止血同时开始，并涉及使血液凝固的过程。更具体地，凝固由信号传递凝固级联控制，所述信号传递凝固级联由13种相互作用并相互活化的凝固因子组成。在凝固级联结束时，纤维蛋白原被转化成纤维蛋白。纤维蛋白纤维的网络会补强创伤闭合，且血小板和其它血细胞被捕获在该网络中并形成血块(血栓)。最后，血小板和内皮释放生长因子控制创伤-愈合过程。在这些过程结束时，纤维蛋白网络被血浆中的酶溶解。

次级止血的凝固级联是基于纤维蛋白原(一种可溶性血浆蛋白)向不溶性纤维蛋白的催化转化。催化该反应的酶是凝血酶，其不会永久地以活性形式在血液中循环，但是作为凝血酶原(凝血酶的无活性前体)存在。导致有活性的凝血酶的凝固级联由两个途径组成：外源性(extrinsic)途径和内源性(intrinsic)途径，它们汇合成一个共同途径，该共同途径包括催化纤维蛋白原向纤维蛋白的转化的活性凝血酶。外源性途径响应于组织因子(因子III)的释放而在损伤部位处开始，且因而也被称作组织因子途径。组织因子是因子VIIa催化的因子X(无活性的)向因子Xa(有活性的)的活化中的辅因子。第二个更复杂的内源性途径被与血小板有关的凝固因子VIII、IX、X、XI和XII活化。还需要蛋白前激肽释放酶(PK)和高分子量激肽原(HK或HMWK)、以及从血小板分泌的钙离子和磷脂。这些组分中的每一种导致因子X向因子Xa的转化。两个途径中的共同点是因子X向因子Xa的活化。因子Xa是在两个位置(arg-thr，然后arg-ile键)切割凝血酶原的酶(例如，丝氨酸内肽酶)，这会产生活性凝血酶并最终导致纤维蛋白原向纤维蛋白的转化。

结果，所述凝固级联是用于诊断和治疗涉及失调的血液凝固或凝固缺失的疾病的合适靶标。例如，通过多种凝固试验可以实现出血性病症诸如血友病(其中在凝固级联中涉及的13种血液凝固因子中的一种或多种可能是有缺陷的)的诊断。另外，已经开发了几个试验来监测溶血栓疗法的进展。已经开发了其它试验来发出血栓溶前或高凝固状态的信号或者监测在心肺旁路手术过程中给患者施用鱼精蛋白的影响。但是，凝固试验的主要价值是在监测口服和静脉内抗凝固疗法中。三个关键诊断试验是凝血酶原时间(PT)、激活部分促凝血酶原激酶时间(activated partial thromboplastin time)(aPTT)和激活凝固时间(ACT)。

已知通过外源性途径和内源性途径中的每一种实现的血液凝固的活化剂。例如，内源性途径的活化可以通过多种带负电荷的不溶物发生。这些物质的作用涉及因子XII和接触活化系统的其它蛋白的特异性吸附，从而导致因子XII、前激肽释放酶和因子XI的蛋白水解性活化的加速。尽管大多数已知的内源性途径的活化剂诸如玻璃、硅石(silica)、C盐(celite)和高岭土是不溶性的，但是已经报道活化通过聚阴离子肝素、硫酸葡聚糖、角叉菜胶和可溶性的鞣花酸而发生(参见，例如，Girolami等人,1966,Blood,27(1):93-102)。在这些物质中独特的是鞣花酸，它是一种在许多水果、坚果和种子中发现的普遍存在的多酚，和一种有效的活化的cephaloplastin试剂(商购可得的cephaloplastin试剂通常也包括磷脂(通常是脑磷脂)作为血小板替代物)。不幸的是，鞣花酸的水不溶解性不支持它在许多凝固测定(诸如被设计成用在一次性使用的凝固测定装置中的aPTT)中作为活化剂的应用，因为包含鞣花酸的活化剂经常需要长时间来制备且在长期储存(例如，在室温大于1-2天)以后是不稳定的。