[发明专利]CD3结合结构域

说明书

本公开涉及人源化CD3结合位点，其包含(a)如SEQ ID NO：8中所描述的重链可变结构域(VH)和如SEQ ID NO：3中所描述的轻链可变结构域(VL)；或(b)如SEQ ID NO：9中所描述的重链可变结构域(VH)和如SEQ ID NO：4中所描述的轻链可变结构域(VL)。CD3结合位点具有增加的稳定性，同时由于在位置VH111和VL49处的突变而保留了结合亲和力。

技术领域

本发明涉及包含新的CD3结合位点的抗原结合蛋白。特别地，本发明涉及多特异性抗原结合蛋白。所述新的CD3结合位点包含人源化VH结构域和VL结构域。

背景技术

CD3抗原与T细胞上的T细胞受体复合体相关。对CD3和靶细胞的抗原具有特异性的多特异性抗原结合蛋白可以触发T细胞对靶细胞的细胞毒活性。即，通过抗原结合蛋白与CD3以及与靶细胞(例如肿瘤细胞)的多特异性结合，可以诱导靶细胞的细胞裂解。具有CD3结合位点的抗原结合蛋白及其产生是本领域已知的(并且描述于例如Kipriyanov等人，1999年，Journal of Molecular Biology 293：41-56；Le Gall等人，2004年，ProteinEngineering，DesignSelection，17/4：357-366)。

除了来源于四源杂交瘤的抗体，已经设计了多种形式的多特异性重组抗体片段。多价抗体片段和可选的多特异性抗体片段的特定形式被称为“串联双抗体”因为它们的设计是基于两个不同多肽的V_H可变结构域和V_L可变结构域的分子间配对，如对双抗体所描述的(Holliger等人，1993年，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90：6444-6448)。所描述的抗体对肿瘤抗原和CD3是双特异性的。与二价scFv-scFv(scFv)₂串联相反，串联双抗体是四价的，因为它们具有四个抗原结合位点。串联双抗体缺乏免疫球蛋白恒定结构域。据报道，串联双抗体具有诸如高亲和力、更高亲合力、更低清除率的优点并显示出有利的体外和体内效率(Kipriyanov等人，J.Mol.Biol.(1999)293，41-56和Kipriyanov Meth.Mol.Biol.(2009)562，177-193)。

这种双特异性串联双抗体可以在肿瘤细胞(例如B-CLL细胞)和人免疫系统的CD3⁺T细胞之间形成桥梁，从而允许杀死肿瘤细胞。肿瘤细胞和T细胞的紧密结合诱导肿瘤细胞的破坏。虽然这种串联双抗体已证明有利于治疗应用(例如，用于治疗肿瘤的治疗概念)，但是仍然需要改进的抗原结合分子。

为了促进在临床前开发期间在非人灵长类动物(NHP)中募集T细胞的多特异性抗体片段的毒理学评估，需要交叉反应性CD3结合结构域。

鼠IgG克隆SP34(EMBO J.1985.4(2)：337-344；J.Immunol.1986，137(4)：1097-100；J.Exp.Med.1991，174：319-326；J.Immunol.1991，147(9)：3047-52)与人结合，并且已经选择食蟹猴CD3ε用于人源化。

尽管通过将鼠VH CDR移植到最同源的人VH框架(人VH3_72)上进行人源化导致分子保持功能，但是将鼠VL CDR移植到具有最高同源性的人VL框架(人vλ7_7a)上，令人惊讶地导致表达不良的串联双抗体或不能识别CD3的串联双抗体。

发明内容

因此，本发明的目的是提供具有功能性VL/VH配对、良好稳定性、良好表达和其它生物物理性质的CD3结合结构域。

这个问题已经通过权利要求的主题而解决。