[发明专利]一种用于细胞保存的包含作为活性成分的植物源重组人血清白蛋白和植物肽的组合物

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于细胞保存的组合物，该组合物含有作为活性成分的植物源重组人血清白蛋白和植物肽，并且使仅能短时间保存的干细胞或原代细胞在室温或低温下依然维持无异源性成分(xeno-free)和无动物成分(animal-free)的组合物，并涉及其用途。

背景技术

目前，细胞治疗技术已经发展到，利用动物组织中分离的细胞或干细胞治疗各种疾病。干细胞是可以在未分化状态下无限增殖并在提供特定环境和条件时分化成具有特定功能和形状的细胞。人胚胎干细胞可以在合适的体外培养条件下进行连续自我更新，并具有分化成构成身体的所有细胞类型的多能性。因此，对人胚胎干细胞的研究结果的应用范围正在扩展到各方面，例如：认识人体发育、分化和生长的基本知识，研制关于人体各种损伤或疾病基础治疗的细胞疗法产品，筛选各种新型候选药物的疗效，确定病因，研制治疗策略等。

通常，采用含有动物血清(胎牛血清)的培养基培养人类干细胞，但是，在这种情况下，尽管细胞培养在被动物血清清洗过的胎牛血清中，但是依然有相当数量的胎牛血清保留在细胞中，成为强异源抗原，而且胎牛血清可能携带有动物源性疾病而造成感染，如狂犬病。因此，美国禁止在无法确认胎牛血清是否残留的情况下，进行人类细胞移植。Pittenger等人(Science 284：143-147,1997)和van et al。(J Clin Invest 58：699-704,1976)在公开文献中提出，从人骨髓分离间充质干细胞的方法和从脂肪组织分离间充质干细胞的方法，文献中表明，α-MEM或DMEM培养基和10-20％的胎牛血清用于细胞培养。然而，这些培养基由于使用动物血清(胎牛血清)而在人类细胞移植中引发了许多安全问题。为了克服这些问题，目前已经尝试在常规细胞培养基中使用人血清代替胎牛血清(Kuznetsov SA，等人，Transplantation.2000Dec 27；70(12)：1780-7)，但是由于干细胞的特性丧失，例如干细胞的增殖能力和分化能力的降低或促进向骨细胞的分化，因此，难以直接使用一般的人血清细胞培养溶液。最近，几个无异物的培养基已经被全球跨国公司商业化，并且吸引了许多研究者和投资者的注意。然而，无异种培养基仍然有许多亟需解决的问题，例如比使用胎牛血清的现有培养基更低的细胞生长速率，培养时多次传代的数量限制，以及基础干细胞特性(如：分化效能)的恶化等。

另外，近年来，医疗官员主导的治疗措施也在增多，包括原代细胞或干细胞从组织中提取并立即移植到人体中，以及细胞治疗药物的积极研制，即便如此，细胞移植前的储存溶液也是亟待解决的问题之一。在以往的多数情况下，收集的细胞浸泡在基础培养基、盐水溶液或缓冲溶液中进行低温储存或运输，但是存在细胞大量死亡或丧失特性的严重问题。因此，为了优化干细胞的组织再生能力，需要开发用于在干细胞移植时增加细胞活力，优化移植效果和激活干细胞的技术，但是该技术尚未得到充分发展。同时，由于原代细胞是未经免疫的正常细胞，其主要由动物组织或官方部门直接培养并及时从活细胞提取获得。原代细胞已经被开发为细胞治疗剂，并且由于具有与真实生物反应特性相似的优点，而被用于生物药物等的生产。

为了在临床试验和细胞治疗剂中使用此类干细胞或原代细胞，亟需开发一种不使用动物提取物的细胞保护性防腐剂，并能使组织中提取细胞和干细胞保持活力，可以使成人和人胚胎干细胞保持未分化的特性，并且在移植入活体之前具有的良好的预期保护性防腐效果。由于，用于细胞保存的组合物中所含成分的种类和组成比依据需要根据所要保存的细胞种类而确定，因此还需要对保存用组合物的组成比进行研究。

由于-196℃极低温度下的冷冻保存能够稳定和安全的保持细胞活力和特性，因此常被用于保存细胞。活细胞按需要通过快速解冻冷冻细胞就可以获得。然而，由于冰晶的形成以及离子不平衡和渗透压会无法避免地导致细胞损伤(其基本上伴随冷冻和解冻)，因此细胞活力随冷冻和解冻后的时间演变而逐渐降低。因此，实际上很难采用冷冻法进行数小时至数天，甚至长期的细胞运输与储存。

发明内容

[技术问题]