[实用新型]绵羊肉用性能特异主效基因等位基因检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及绵羊肉用性能特异主效基因等位基因检测试剂盒。

背景技术

绵羊肉用性能(产肉量)是重要的经济性状，检测并选留具有优良肉用性能的绵羊可以显著提高养殖户经济效益。随着现代生物技术的发展，利用分子遗传学方法能够准确检测并选留具有优良肉用性能的绵羊。基于动物DNA序列影响表型性状的基本生物学原理，应用现代分子遗传学方法，寻找鉴定影响绵羊肉用性能的高效特异等位基因是评价绵羊肉用性能的有效手段之一。绵羊肉用性能(产肉量)是数量性状，受微效多基因调控，也有效应较大的主基因(Majorgene)。目前，检测影响绵羊肉用性能的基因大多数为微效基因，而微效基因数量大且并非随机分布，通过检测微效基因评估绵羊肉用性能的准确性不高，多个微效基因的检测结果可能互相冲突且费时费力。而通过寻找和分析效应较大的主基因DNA序列，检测影响绵羊产肉性能的主基因特异等位基因，可以有效提高绵羊肉用性能评估的准确性，缩短绵羊肉用性能改良进程，进而提高绵羊个体经济效益。

绵羊FABP4基因定位于9号染色体，包括4个外显子和3个内含子，其被认为是影响肉质性状的主要候选基因之一。绵羊FABP4基因具有丰富的变异，而剖析各个等位基因对肉用性能的影响程度有利于开发DNA标记物。

本实用新型采用的绵羊肉用性能分子标记选种技术主要针对特异主效基因FABP4，利用PCR-SSCP技术检测特异等位基因，然后根据检测结果评估携带不同等位基因个体的肉用性能等级，从而判断是否留做种用。上述检测过程需要使用多种试剂，因此很需要有一种存放盒，能够将试剂瓶及主要辅助检测用品集装在一个盒中作为一个单元取用，检测者使用时只需取一次盒即可实施操作，使用完可以存回原盒送检，这将是很方便之举，同时这样也可避免造成二次污染。

实用新型内容

本实用新型提供了绵羊肉用性能特异主效基因等位基因检测试剂盒，将检测过程中所使用的多种试剂存放在一起，方便使用。

本实用新型提供一种绵羊肉用性能特异主效基因等位基因检测试剂盒，包括盒体、盒盖和衬垫，在衬垫12上设有9个容器孔，其特征在于：所述容器孔分3列放置，每列之间设有挡板或凹槽；左列上部设有容器孔9，容器孔9为长方体形，左列下部横向并排设有两个容器孔，分别为容器孔1和容器孔2；中间列设有竖向的两个容器孔，分别为容器孔3和容器孔4，所述容器孔4的直径大于所述容器孔3的直径；右列设有竖向的四个容器孔，分别为容器孔5、容器孔6、容器孔7和容器孔8。

本实用新型提供一种绵羊肉用性能特异主效基因等位基因检测试剂盒，包括盒体(11)、盒盖(10)和衬垫(12)，在衬垫(12)上设有9个容器孔，在容器孔中分别放置特异性上下游引物混合溶液和FABP4基因的等位基因的标准样(4)以及PCR反应液(3)；所述FABP4基因的等位基因的标准样由等量的FABP4*A的标准样、FABP4*B的标准样、FABP4*C的标准样、FABP4*D的标准样和FABP4*E的标准样组成。

优选地，在所述容器孔中还分别放置20mMNaOH试剂(1)、1倍TE溶液(2)、银染液(5)、40％的丙烯酰胺溶液(6)、变性上样缓冲液(7)、TEMED溶液和10％的过硫酸铵溶液(8)和特殊DNA承载滤纸(9)。

进一步地，在所述容器孔中分别放置5ml20mMNaOH试剂(1)、5ml1倍TE溶液(2)、2mlPCR反应液(3)、0.5ml特异性上下游引物混合溶液和0.5ml等位基因标准DNA样本、5ml银染液(5)、10ml40％的丙烯酰胺溶液(6)、0.5ml变性上样缓冲液(7)、2mlTEMED溶液和2ml10％的过硫酸铵溶液(8)和特殊DNA承载滤纸(9)。

应用本实用新型的试剂盒检测绵羊肉用性能特异主效基因等位基因的方法如下：

(一)收集具有产肉性能指标(腿部肉重、腰部肉重、肩部肉重、总肉重或腿部肉比例、腰部肉比例和肩部肉比例)的绵羊DNA血样。

(二)PCR扩增所收集的DNA血样。

PCR扩增时所使用引物为：

上游引物18bp核苷酸，下游引物20bp核苷酸，扩增片段大小约为350bp，具体引物序列如下：

上游引物Up:TGTGGGCTTTGCTACCAG；

下游引物Dn：ACTTAGATGAAGGTGCTCTG。

PCR反应体系为：