[实用新型]检测前列腺癌相关融合基因的胶体金试纸

说明书

技术领域

本实用新型涉及检测前列腺癌相关融合基因的胶体金试纸，属于医学生物技术领域。

背景技术

前列腺癌(prostate cancer,PCa)位居男性好发肿瘤中第一位，在男性肿瘤死亡率中位居第二。随着我们国家人口老龄化，PCa的发病率正逐年上升，成为威胁我国男性健康的公共问题。

基因融合是染色体重排导致的两个基因的融合，常见于肿瘤中。TMPRSS2-ERG基因融合是前列腺癌中最常出现的基因融合类型。TMPRSS2-ERG融合基因是在PCa中特异存在的，在血浆、前列腺液和尿液中检测这种DNA重组可用来筛查PCa。

目前检测TMPRSS2-ERG融合基因的方法包括荧光原位杂交(FISH)、RT-PCR检测和测序技术。FISH方法耗时并且技术要求高，RT-PCR容易受到RNA降解影响检测敏感性，而测序技术因价格昂贵尚未普及。因此有必要开发一种容易操作、价格适中、检测敏感性高的检测试剂。

实用新型内容

本实用新型要解决的技术问题是提供检测前列腺癌相关融合基因的胶体金试纸。

为实现上述目的，本实用新型采用以下设计方案：

一种检测前列腺癌相关融合基因的胶体金试纸，由载体、硝酸纤维膜、胶体金结合物垫、样品垫和吸收垫组成，其中硝酸纤维膜上设有对照线和检测线，硝酸纤维膜的一端设有胶体金结合物垫和样品垫，另一端设有吸收垫。

所述胶体金结合物垫为红色胶体金标记TMPRSS2-ERG融合蛋白单克隆抗体的胶体金结合物垫。

所述单克隆抗体为杂交瘤细胞株4F2，CGMCC No.7051表达的单克隆抗体。

本实用新型选择TMPRSS2-ERG融合基因表达蛋白序列作为抗原，采用杂交瘤技术，以该抗原免疫小鼠，对杂交瘤细胞表达产物进行筛选和验证，得到表达强特异性的单克隆抗体的细胞株。抗原蛋白购自艾比玛特生物医药(上海)有限公司。蛋白名称：TMPRSS2-ERG PCa融合基因表达的dERG((N-terminal truncated ERG)(切 除顶端的ERG蛋白) )蛋白；种属：Homo sapiens；蛋白定位：PCa上皮细胞；NCBI Number：ACA81385.1。

杂交瘤细胞株4F2，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期2012年12月24日，名称为杂交瘤细胞，保藏号为CGMCC No.7051。该细胞株表达抗TMPRSS2-ERG融合基因表达的dERG蛋白((N-terminal truncated ERG)(切除顶端的ERG蛋白))的单克隆抗体。

胶体金标记单克隆抗体为本领域常规方法：将1％氯金酸30ml、2％柠檬酸三钠18ml、双蒸水720混合加热，加入胶体金，加入单克隆抗体包被，离心，得到胶体金标记的单克隆抗体；用吸水玻璃纤维纸吸收胶体金包被的单克隆抗体并干燥，既可用于制备。

所述对照线为包被羊抗鼠IgG多克隆抗体。

所述检测线为包被合成抗原。(TMPRSS2-ERG截短的多肽，委托Abmart合成)

所述样品垫为玻璃纤维材质。

所述吸收垫为棉浆板。

本实用新型基于胶体金的免疫层析原理，使用竞争法：

当待测物中有被测的抗原物质(即TMPRSS2-ERG融合蛋白)时，待测物中的抗原物质就会与标记胶体金的融合蛋白单克隆抗体形成Ag-Ab-Au(抗原-抗体-胶体金)复合物，复合物在虹吸作用下沿硝酸纤维素膜向上层析，不与包被在硝酸纤维素膜上的合成融合蛋白免疫原结合，仅会在对照线处出现一条色带(C线)，结果为阳性，说明被检测的样品中含有融合蛋白。

当待测物质中没有被测的抗原物质时，标记胶体金的融合蛋白单克隆抗体就会与包被在硝酸纤维素膜上的融合蛋白合成免疫原结合，形成Ag-Ab-Au复合物，此时检测线处可看到一条明显色带(T线，检测线)，因此当检测试纸上可看到两条线(C线和T线)时，结果为阴性，说明被检测的样品未含融合蛋白。

基于胶体金免疫层析法原理，使用竞争法。重组抗原包被于硝酸纤维素膜的检测线21位置，抗体包被于对照线22位置。检测时样本中的抗原与胶体金标记的抗体结合，混合物在虹吸作用下沿硝酸纤维素膜向上层析，与膜上检测线21的重组抗原发生与抗体竞争反应，根据竞争法原理，T线位置不会形成红色条带，相反阴性样本则会在T线位置形成红色条带。无论样本抗原存在与否，混合物在沿膜向上层析到达对照线C线位置时，均会出现红色条带，此红色条带表示样本量充分，流动正确且试剂有 效。