[发明专利]一种果蔬食品及功能保健品抗氧化活性的评价方法

说明书

本发明公开了一种果蔬食品及功能保健品抗氧化活性的评价方法。该方法先将被测样品的预处理：将待测原料配置成水匀浆或直接取口服液类保健食品；然后对样品进行多酶联合处理提取，依次包括样品的胃蛋白酶处理、胰蛋白酶处理、链霉蛋白酶E处理和植物复合水解酶Viscozyme L处理，再利用冷乙酸乙酯萃取的方式进行提取液的还原糖的去除，最后用现有方法进行抗氧化物质含量及活性分析，本发明通过对被测样品的抗氧化活性物质的提取中采用模拟人体消化过程的多酶联合酶解方法，再结合细胞水平的抗氧化活性分析方法，从而建立一种生物相关性更强，更接近动物试验水平的抗氧化活性评价方法。

技术领域

本发明涉及一种抗氧化活性的评价方法，特别是涉及一种果蔬食品及功能保健品抗氧化活性的评价方法，该方法可以应用于生物医药、食品、保健品等行业领域。

背景技术

现代医学研究表明，包括心血管类疾病、癌症、糖尿病等多种慢性疾病都与自由基密切相关。在正常情况下，人体内自由基的产生与消除处于平衡状态。随着年龄的增长，抗氧化酶类活性下降，使体内清除自由基的能力下降，体内过量的自由基对生物大分子(如蛋白质、脂质、DNA)具有损伤作用，进而导致疾病和衰老。同时，外界因素如污染的空气、食物，不良生活方式、情绪因素等也会造成体内自由基的过量产生。多食富含有天然抗氧化剂的果蔬、服用含有天然抗氧化剂的保健食品是减轻机体氧化最有效的方法。

目前评价抗氧化活性的方法有体内和体外两类。体内方法即动物或人体试验，这种方法的优点是准确性高，但时间长、成本高、费用高，因此一般不作为大量初筛和前期评价工作，只作为功能食品的最终评价方法。

体外方法分为化学法(如ORAC、PSC、DPPH、ABTS、FRAP等)和基于细胞水平的方法(Cellular Antioxidant Activity Assay，简称CAA)。化学法在生理条件和环境、吸收和生物利用率、代谢等方面无法达到或接近体内的真实环境，因此不能如实反映抗氧化物质在体内的真实状况。而细胞抗氧化活性分析CAA方法，由于它考虑了生物环境及吸收等，因此其生物相关性很高，能较真实地反映出抗氧化物质在体内的抗氧化活性大小。利用CAA评价方法来筛选评价比化学法所得的结果更准确可靠。相对而言，CAA方法是抗氧化活性评价的较好的方法。

由于抗氧化活性成分的多样性，它们在各种果蔬菜或功能食品中存在的方式是多样的，如多酚类物质，它既有游离状态的自由酚，也有与纤维素、蛋白质、多糖等结合在一起的结合酚；而且，不论是自由的还是结合状态的多酚，在人体内经过消化时结构也会发生变化，而在体内最终起抗氧化作用的是消化之后的结构状态。但是，目前不论是化学法还是细胞CAA法，在抗氧化活性物质的提取过程中都是采用溶剂提取法，虽然考虑到了游离态和结合态的问题，但没有考虑到人体中的消化过程及结构的转变问题；因此，溶剂提取法存在缺陷，有待进一步改进。

发明内容

针对目前体外抗氧化活性分析和评价方法中直接采用溶剂对样品的抗氧化剂物质进行提取存在的与人体消化吸收真实体系差异性较大的问题，本发明建立一种基于细胞水平的新的抗氧化活性评价方法，通过对被测样品的抗氧化活性物质的提取中采用模拟人体消化过程的多酶联合酶解方法，再结合细胞水平的抗氧化活性分析方法，从而建立一种生物相关性更强，更接近动物试验水平的抗氧化活性评价方法。

本发明通过在体外模仿人体消化过程，以提取出样品中的不同状态的抗氧化活性物质，结合化学及细胞水平的抗氧化活性评价方法，对果蔬菜、功能食品、保健品及普通食品的抗氧化活性进行全面系统评价。具体而言，本发明在样品抗氧化活性物质的提取过程中采用模拟人体消化的多酶联合酶解提法代替传统的溶剂萃取法，并与抗氧化活性的CAA方法有机结合起来对抗氧化活性进行综合评价，可以最大限度使测定结果接近人体和动物试验，因此更为准确可靠。