[发明专利]一种治疗风热感冒中药的HPLC特征图谱的构建方法

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种治疗风热感冒制剂的质量控制方法。

背景技术

中药特征图谱能全面、综合的反映所含成分的相对关系，较好的体现中药成分的复杂性和相关性，具有特征明显、专属性强、重现性好等特点，随着中医中药的推广应用，特征图谱作为中草药及其提取物质量控制方法，目前已成为被国内外广泛接受的一种对中药质量进行评价的技术。

此前，一种治疗风热感冒制剂(专利号CN 104623082 A)没有明确的检测方法，而对其中的药味(金银花、连翘、锦灯笼、紫箕贯众、黄芩、甘草)，多采用中国药典中给出的方法，即单独的对其中各味药的成分进行含量测定(金银花-绿原酸、连翘-连翘苷、黄芩-黄芩苷、甘草-甘草苷)。前述检测方法存在的不足之处有：

1、在药典规定的方法中没有对其中多味药材的多个主要化学成分进行全面、系统的检测。

2、现行无质量检测方法不能监控原料药材、中间体、成品的质量。

综上所述，现有技术中对一种治疗风热感冒制剂(专利号CN 104623082 A)方法存在方法繁琐、不能快速、全面的对一种治疗风热感冒制剂进行检测和鉴定等缺陷。

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗风热感冒中药的HPLC特征图谱的构建方法，克服现有的检测方法存在的前述不足。

本发明的HPLC特征图谱的构建方法包括：

1、供试品溶液的制备:

取本品2g-5g，精密称定，精密加取30％-100％甲醇25-30ml，称定重量，用超声处理30-60分钟取出，待溶液冷却至室温，用30％-100％甲醇补重，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2、参照物溶液的制备：分别精密称取绿原酸、连翘酯苷B、甘草苷、木犀草苷、连翘苷、黄芩苷、甘草酸7个参照物适量，加50％甲醇制成每1mL分别含绿原酸35.50μg、连翘酯苷B50.10μg、甘草苷42.50μg、木犀草苷39.45μg、连翘苷31.80μg、甘草酸42.65μg、黄芩苷40.00μg的混合参照物贮备溶液。使用时精密量取2.00mL，置25mL量瓶中，用30％-100％甲醇稀释至刻度，作为参照物溶液。

3、色谱条件：采用ZORBAXSB-C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相乙腈-水(乙腈9％-55％)梯度洗脱；体积流量0.8mL/min；DAD检测器，波长为253nm；柱温35℃；进样量10μL。理论板数均不低于10000。

4、测定：分别精密吸取供试品溶液和参照物溶液各10μl注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到一种治疗风热感冒中药的HPLC特征图谱。

本发明的HPLC特征图谱的最佳构建方法如下：(以下技术方案中所记载的各物质的用量或用量范围，旨在表明各物质间的用量比例关系，并不限定在记载的具体数量上。)

供试品溶液的制备:取本品2g，精密称定，精密加取50％甲醇25ml，称定重量，用超声处理30分钟取出，待溶液冷却至室温，用50％甲醇补重，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

参照物溶液的制备：分别精密称取绿原酸、连翘酯苷B、甘草苷、木犀草苷、连翘苷、黄芩苷、甘草酸7个参照物适量，加50％甲醇制成每1mL分别含绿原酸35.50μg、连翘酯苷B50.10μg、甘草苷42.50μg、木犀草苷39.45μg、连翘苷31.80μg、甘草酸42.65μg、黄芩苷40.00μg、的混合参照物贮备溶液及单独参照物。使用时精密量取2.00mL，置25mL量瓶中，用50％甲醇稀释至刻度，作为参照物溶液。

3、色谱条件：采用ZORBAXSB-C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相梯度洗脱程序见表1；体积流量0.8mL/min；DAD检测器，波长为253nm；柱温35℃；进样量10μL。理论板数均不低于10000。

表1流动相梯度洗脱条件

4、测定：分别精密吸取供试品溶液和参照物溶液各10μl注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到一种治疗风热感冒中药的HPLC特征图谱。

其中所述一种治疗风热感冒制剂的HPLC特征图谱中共有7个特征共有峰，其中归属于金银花的特征图谱具有2个特征共有峰：1号峰、2号峰；归属于连翘的特征图谱具有2个特征共有峰：3号峰、4号峰；归属于甘草的特征图谱具有2个特征共有峰：5号峰、6号峰；归属于黄芩的特征图谱具有1个特征共有峰：7号峰；