[发明专利]一种平贝母药材指纹图谱的建立方法

权利要求书

1.一种平贝母药材生物碱类指纹图谱的建立方法，其特征在于：该方法包括采用高效液相色谱法对平贝母药材进行检测，其中色谱条件包括：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

流动相：流动相A为含1mmol/L乙酸铵的0.1%三乙胺水溶液，流动相B为乙腈溶液；采用梯度洗脱，洗脱步骤如下，其中流动相比例均为体积百分比：

0~8 min，流动相A为70%~65%，流动相B为30%~35%；

8~25 min，流动相A为65%~55%，流动相B为35%~45%；

25~40 min，流动相A为55%~5%，流动相B为45%~95%；

40~43 min，流动相A为5%，流动相B为95%；

43~48 min，流动相A为5%~70%，流动相B为95%~30%；

48~58 min，流动相A为70%，流动相B为30%；

所述方法还包括通过以下步骤制备对照品溶液：取贝母辛、贝母素甲、贝母素乙、西贝母碱四种生物碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每ml含贝母辛0.140 mg、贝母素甲0.133 mg、贝母素乙0.100 mg、西贝母碱0.372 mg的混合对照品溶液，即得。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括通过以下步骤制备供试品溶液：把平贝母打粉，过四号筛，取2g平贝母药材粉末，加氨水4ml浸润2 h，用比例为4:1的三氯甲烷-甲醇混合溶液40 ml回流提取，过滤，取滤液，蒸干，残渣用甲醇溶解定容至2 ml，12000 r/min 离心10 min沉淀不溶性物质，取上清液，将上清液与1 g硅胶混合均匀，通过内径为1.5 cm、填料重量为5g的薄层层析硅胶柱，以水30 ml洗脱，弃去水洗液，继用比例为9:1的乙酸乙酯-甲醇40 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解定容至2 ml，用0.22 μm微孔滤膜滤过，即得。

3.根据权利要求1-2任意一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

（a）制备供试品溶液：把平贝母打粉，过四号筛，取2g平贝母药材粉末，加氨水4ml浸润2h，用比例为4:1的三氯甲烷-甲醇混合溶液40 ml回流提取，过滤，取滤液，蒸干，残渣用甲醇溶解定容至2 ml，12000 r/min 离心10 min沉淀不溶性物质，取上清液，将上清液与1 g硅胶混合均匀，通过内径为1.5 cm、填料重量为5g的薄层层析硅胶柱，以水30 ml洗脱，弃去水洗液，继用比例为9:1的乙酸乙酯-甲醇40 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解定容至2 ml，用0.22 μm微孔滤膜滤过，即得；

（b）制备对照品溶液：取贝母辛、贝母素甲、贝母素乙、西贝母碱四种生物碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每ml含贝母辛0.140 mg、贝母素甲0.133 mg、贝母素乙0.100 mg、西贝母碱0.372 mg的混合对照品溶液，即得；

（c）测定：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl注入高效液相色谱仪，根据以下条件进行测定，得到平贝母药材指纹图谱；

其中，色谱条件包括：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

流动相：流动相A为含1mmol/L乙酸铵的0.1%三乙胺水溶液，流动相B为乙腈溶液；采用梯度洗脱，洗脱步骤如下，其中流动相比例均为体积百分比：

0~8 min，流动相A为70%~65%，流动相B为30%~35%；

8~25 min，流动相A为65%~55%，流动相B为35%~45%；

25~40 min，流动相A为55%~5%，流动相B为45%~95%；

40~43 min，流动相A为5%，流动相B为95%；

43~48 min，流动相A为5%~70%，流动相B为95%~30%；

48~58 min，流动相A为70%，流动相B为30%；

流速为1 ml/min；

柱温为 25℃；

进样量为 10 μl；

蒸发光散射器的条件：

漂移管温度：85℃；

雾化器流速：2.2L/min；

Grain：1。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：对多个平贝母指纹图谱进行比较，选出共有特征峰，得到平贝母特征指纹图谱。