[发明专利]猪细小病毒病-猪伪狂犬病二联灭活疫苗及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及猪细小病毒病-猪伪狂犬病二联灭活疫苗，还涉及所述二 联灭活疫苗的制备方法及其在预防猪细小病毒病和猪伪狂犬病中的应用， 属于猪细小病毒病、猪伪狂犬病二联灭活疫苗的制备领域。

背景技术

猪细小病毒(Porcineparvovims，PPV)和猪伪狂犬病病毒 (Pseudorabiesvires，PRV)均很早就被证明能导致母猪繁殖障碍征。母猪被 感染后，临床症状相似，均表现为流产、死胎、产木乃伊胎，母猪屡配不 孕等。猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒呈世界性分布，给全球养猪业造成了 巨大的、持续经济损失。中国于1983年首先在上海发现猪细小病毒感染， 并进行了病毒的分离和鉴定，于1947年首次发现猪伪狂犬病，到目前为 止已经感染中国大多数地区，是影响中国猪养殖业的两种重要疫病。

猪细小病毒病、猪伪狂犬病目前尚无有效的药物治疗方法，进行疫苗 接种是预防、控制甚至消灭猪细小病毒病、猪伪狂犬病最主要的措施之一。 灭活疫苗由于其安全性高，不会引起散毒，也不会带来潜伏感染的问题， 成为预防免疫的主要手段之一。目前中国市场上仅有猪细小病毒病、猪伪 狂犬病的单苗，预防这两种疫病时需单独接种PPV和PRV单苗，免疫程 序复杂、成本较高。

随着养猪业向集约化方向的发展，防疫密度高，劳动强度大，联苗的 研究和使用已成为一种必然趋势。因此，迫切需要开发一种免疫性高、安 全性好、免疫程序简便的猪细小病毒与猪伪狂犬病毒二联灭活疫苗，特别 是需要一种简单方便、工艺易于放大的二联灭活疫苗的制备方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种猪细小病毒病-猪伪狂犬病二 联灭活疫苗，该二联灭活疫苗能够应用于预防猪细小病毒病和猪伪狂犬 病，不仅安全性好、免疫效果好，而且免疫程序简便；

本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种猪细小病毒病-猪伪狂 犬病二联灭活疫苗的制备方法，该方法简单方便，工艺易于放大。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：

本发明首先公开了一种猪细小病毒病-猪伪狂犬病二联灭活疫苗，包 括：水相和油相；其中所述水相包括猪细小病毒抗原和猪伪狂犬病毒抗原； 按照体积比计，猪细小病毒抗原：猪伪狂犬病毒抗原＝1-5:1-5；优选的， 按照体积比计，猪细小病毒抗原：猪伪狂犬病毒抗原＝1-3:1-3；最优选为 2:3。

本发明考察了猪细小病毒病-猪伪狂犬病二联灭活疫苗中猪细小病毒 抗原和猪伪狂犬病毒抗原的不同比例。结果表明，猪细小病毒抗原：猪伪 狂犬病毒抗原在5:1-2:3的范围内，免疫动物后的HI抗体效价、血清阳转 数均高于PPV单苗或与PPV单苗相当；当PPV：PRV＝1:2-1:5的二联苗 免疫后血清阳转数、HI抗体效价均低于PPV单苗，甚至PPV：PRV＝1:4-1:5 的二联苗免疫后的HI抗体效价低于1:64，未能达到效检标准。其中只有 猪细小病毒抗原：猪伪狂犬病毒抗原＝2:3时制备的二联灭活疫苗对 PRV-JL株的攻毒保护率较PRV单苗(保护率为80％)或其它抗原比例(保 护率为50％-85％)的效果显著好，保护率达到100％；而且免疫动物均无 不良反应，安全性好；其它抗原比例的免疫组均出现不良反应，不良反应 率在10％以上。因此，PPV：PRV＝2:3为本发明制备二联疫苗的最佳配比， 而其他比例配制的二联苗与各单苗的免疫效果相比优势不显著，甚至未能 达到效检标准。

本发明所述猪细小病毒抗原的制备方法包括：培养猪细小病毒，收获 病毒液，灭活、浓缩，即得。其中，所述培养猪细小病毒的细胞为ST细 胞、PK-15细胞、猪肾传代细胞(IBRS-2)或猪肾原代细胞；优选为ST 细胞；所述病毒液的病毒含量≥10^6.17TCID₅₀/ml；所述灭活是向病毒液中 加入二乙烯亚胺(BEI)溶液灭活；优选的，向病毒液中加入0.1mol/LBEI 溶液，使BEI溶液的终浓度为4mM，32℃灭活48小时；所述浓缩为浓缩 5倍；所述浓缩的方法为超滤法。