[发明专利]水中浮游藻类叶绿素的测定方法

说明书

技术领域

本发明属于一种藻类叶绿素测定方法，具体涉及利用分光光度法测定水体中藻类叶绿素a的方法，适合于各种地表水的测定。

背景技术

叶绿素是植物光合作用中的重要光合色素。通过测定浮游植物叶绿素，可掌握水体中初级生产力的情况。在环境监测中，水体中叶绿素a含量能够很好地反映水体中浮游藻类的生物量，因而被当作水体富营养化的指标之一。

测定水中浮游藻类叶绿素a的方法有3类，即分光光度法、荧光法和高效液相色谱法。其中分光光度法所需仪器简单，操作简便，成本低廉，是目前采用的主要方法。

美国的《水和废水监测分析方法》(Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater)提出的标准方法是使用玻璃纤维滤膜过滤水样，加90％丙酮研磨，在黑暗条件下提取2h以上，离心后用分光光度计测定吸光度，再计算出叶绿素a的含量。该方法的缺点是玻璃纤维滤膜价格相对较高，挥发性有机物丙酮对人体具有一定的危害，研磨耗时较长，转移提取液时容易损失，而且需要低温保存提取液。

我国国家环保总局制定的《水和废水监测分析方法》(第四版)采用的方法是用醋酸纤维滤膜过滤水样，截留藻类的滤膜低温干燥6～8h后，加90％丙酮研磨提取，离心后用分光光度计测定并计算叶绿素a含量。该方法的缺点是丙酮对人体具有危害性，研磨耗时较长，转移提取液时容易损失。

西安建筑科技大学黄廷林等(专利公开号CN1631117A)介绍了一种较为安全的乙醇提取法，该方法使用90％的乙醇作为提取液，使测试过程的安全性得到提高。但是该方法的不足之处主要有两点：第一是使用0.8μm滤膜，孔径偏大，会有部分超微藻类无法截留。第二，该方法同样需要研磨，转移提取液时容易损失，耗时费力。

发明内容

本发明目的是通过对原有藻类叶绿素测定方法的改进，提供一种设备简单、操作简便、安全无害、结果准确性高的测定方法。

本发明的目的是通过以下解决方案实现的：

采用醋酸纤维滤膜过滤水中的浮游藻类，用无水乙醇直接浸泡截留了藻类的醋酸纤维滤膜，室温下置于黑暗处提取6～24h后取出离心，获得上清液在630、647、664、750nm波长下测定吸光度，并计算水体中叶绿素a的含量。

所述的醋酸纤维滤膜采用0.45μm孔径。

过滤后滤膜置于10ml具塞离心管，加10ml无水乙醇浸泡。

所述提取条件为黑暗处，温度条件为15-27℃，提取时间为6～24h。

所述提取液离心条件为3500r·min^-1，离心10min。

使用光程为1cm的玻璃比色皿，无水乙醇作参比进行比色。

依照下式计算叶绿素a含量。

V——过滤水样体积(L)；

D——不同波长下的吸光度；

V₁——提取液定容后的体积(ml)

本发明的测定方法有如下优点：

无需研磨，可以大大节省人力，并避免因转移提取液而造成的叶绿素损失；使用无水乙醇作为提取液，对人体安全无毒害；提取液可放置于室温下，无需冰箱保存，操作简便、减少能耗；一般水样测定项目较多，叶绿素可以在提取6～24h之后再行比色测定，因而能够缓解人手不足的矛盾；提取更完全，结果重现性好。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明：

取某湖泊水体若干作为试验水样，使用孔径为0.45μm的醋酸纤维滤膜()过滤100ml水样，将滤膜放入10ml具塞离心管中，加入分析纯无水乙醇10ml，盖上塞子，摇动数次后放置于黑暗处。6～24h后取出离心管，摇匀后使用医用离心机以3500r·min^-1离心，取上清液于1cm玻璃比色皿，以无水乙醇作参比，用光栅分光光度计在630、647、664、750nm波长下测定吸光度，利用前面所述公式计算叶绿素a含量。试验设3个平行。

为验证本方法的准确性和重现性，同时取同一水样，用国家环境保护总局编写的《水和废水监测分析方法》(第四版)的叶绿素测定方法测定一组数据(表1中第二列数据)(基本条件是研磨，丙酮提取)。此外，还测定了在不研磨条件下，使用乙醇不同提取时间(2h、6h、24h、48h)的提取量，以及不研磨条件下，使用丙酮不同时间的提取量，用来验证本方法的准确性。