[发明专利]一种用于免疫治疗的EB病毒LMP2A串联表位肽及其应用

说明书

技术领域

本发明属于免疫学技术领域，尤其涉及一种用于免疫治疗的EB病毒LMP2A串联表位肽及其应用。

背景技术

EB病毒(Epstein-BarrVirus，EBV)属于疱疹病毒γ亚科嗜淋巴细胞病毒成员，是人类发现的第一个与肿瘤发生有关的人类病毒。EB病毒感染的靶细胞主要为B淋巴细胞。最近的研究证实，EB病毒还可感染人体T细胞、NK细胞、单核巨噬细胞。EB病毒感染与多种疾病有关，如与非洲儿童Burkit淋巴瘤、鼻咽癌、霍奇金淋巴瘤、成人T/NK细胞淋巴瘤、各种免疫抑制剂治疗患者和器官移植患者淋巴细胞增生紊乱引起的淋巴瘤及EBV相关的噬血细胞增多症等密切相关。EB病毒感染靶细胞后表达多种蛋白，包括6种核抗原EBNA1、2、3A、3B、3C、和LP，3种潜伏期膜蛋白LMP1、2A、2B）和2种基因EBER-1、2，其中LMP2（LMP2A、2B）在噬血细胞综合症、淋巴瘤和淋巴细胞增殖病细胞中均有表达。EB病毒的这些蛋白抗原可以诱发机体的细胞免疫反应。

自1964年在鼻咽癌（nasopharyngealcarcinoma，NPC）组织中首先发现存在有EB病毒DNA以来，大量的血清流行病学研究已证明EB病毒与鼻咽癌有关。鼻咽癌是上皮来源的恶性肿瘤，高发于东南亚及我国华南地区。临床上鼻咽癌通常不宜手术治疗，放疗、化疗后也不能完全有效清除肿瘤细胞，部分患者易复发和转移，并且治疗产生的副作用又影响了自身的免疫系统。因此目前，在倡导鼻咽癌综合治疗的同时更加注重免疫治疗。

T细胞只能识别由抗原递呈细胞（APC）递呈的抗原肽-MHC分子复合物。树突状细胞（DC）是目前发现功能最强的APC，能激发初始型和记忆型T细胞，产生有效的CTL应答。其以DC为基础的免疫治疗已在许多肿瘤的治疗中取得了良好的效果，可对肿瘤细胞进行有效的靶向性杀伤，而不伤害正常细胞，是当前抗肿瘤免疫治疗研究的热点之一。但是，目前的杀瘤效率都还较低。

发明内容

针对以上技术问题，本发明公开了一种用于免疫治疗的EB病毒LMP2A串联表位肽及其应用，将所述EB病毒LMP2A（latentmembraneprotein2A，潜伏膜蛋白2A）串联表位肽负载人外周血来源的DCs，DCs可被有效地激活，诱导成熟并能够将其递呈到DCs（dendriticcells，树突状细胞）细胞表面，与CTL细胞共培养后可激活特异性的抗病毒CTL（cytotoxicTlymphocytes，细胞毒性T淋巴细胞），并可分泌更多的细胞因子，促进淋巴细胞的增殖，具有更显著的肿瘤杀伤功能，更高的肿瘤细胞杀伤效率。

对此，本发明采用的技术方案为：

一种用于免疫治疗的EB病毒LMP2A串联表位肽，所述用于免疫治疗的EB病毒LMP2A串联表位肽包括SEQIDNO：1的氨基酸序列。

采用此技术方案，将LMP2A_356-364和LMP2A_426-434进行串联，得到LMP2A串联表位肽LMP2A_{356-364/426-434}；LMP2A_356-364和LMP2A_426-434的序列为：

LMP2A_356-364：FLYALALLL；

LMP2A_426-434：CLGGLLTMV；

两者串联后得到的串联表位肽LMP2A_{356-364/426-434}的序列为：

串联表位肽LMP2A：FLYALALLLCLGGLLTMV。

用体外构建质粒，包装病毒转染DCs的方法虽然可使目的蛋白在DCs内表达，但病毒的安全性在临床应用中仍受到一定限制，且不易被患者所接受。另外病毒对DCs的感染效率和表达效率都与病毒包装的滴度相关，操作重复性较差。而采用抗原表位肽对DCs直接负载，操作简便，可重复性高，而且经过实验证实发现LMP2A的串联肽与单个表位肽相比，能更有效地诱导DCs成熟，促进特异性CTL的增殖，能够更加有效地靶向性杀伤鼻咽癌细胞系。

所述LMP2A串联表位肽_{356-364/426-434}负载DCs后，能更加有效地促进DCs成熟和表位肽递呈能力，可以分泌更多的细胞因子。负载了该串联表位肽的DCs与CTL共培养后，可诱导出EB病毒特异性的CTL细胞，实验证明，其在体外和体内均可有效地靶向性杀伤鼻咽癌细胞系CNE1。