[发明专利]一种用高效液相色谱分离纯化奈马菌素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种纯化方法，特别是一种高效液相色谱法纯化莫西菌素前体奈马菌素的方法。

背景技术

随着抗寄生虫药需求的持续增长，得到高纯度高药效的抗寄生虫药物已是一种不可或缺的技术需求。

莫西菌素(Moxidectin)是一种新型的抗寄生虫大环内酯类第三代阿维菌素类药物，其有更高的脂溶性和水溶性，在血浆中的代谢产物比其他阿维菌素类的药物如伊维菌素、多拉菌素等高，其在体内停留的时间长，因而药效持续更长，可对牛、羊、骆驼安全注射并预防体内外寄生虫。若想高效生产莫西菌素必须首先得到高纯度高回收率的奈马菌素(Nemadectin)。奈马菌素经过化学修饰或者衍生，可以得到莫西菌素。

奈马菌素又名尼莫克汀，它是一种十六元大环内脂类驱虫抗生素，由蓝灰链霉菌发酵生产，也是米尔贝霉素族的一员，同莫西菌素一样可以用于治疗牛羊等动物体内外寄生虫。其具有杀虫谱广、易降解、低残留、无抗药性、对人畜无害、环境污染少等优点。奈马菌素药学活性不如莫西菌素，高纯度的奈马菌素对高纯度的莫西菌素的合成具有重要意义。

奈马菌素的分子式为C₃₆H₅₂O₈，其结构式如下：

奈马菌素相对分子质量小于2000，其疏水性较强，在有机溶剂中易溶，可采用反相液相色谱(RPLC)的方法制备。

中国专利CN104193760A公开了一种利用奈马菌素发酵液提取奈马菌素粗品的方法，该方法主要采用板框过滤、闪蒸干燥、浸提、降膜浓缩、酸化、脱色处理、萃取、反萃取、吸附、结晶等一系列物化过程，得到奈马菌素粗品。但该过程步骤繁杂，且该专利并未涉及该过程得到奈马菌素的纯度。

中国专利CN103588784A公开了一种制备高纯度奈马菌素的方法，该方法需要经过萃取、离子交换树脂脱色、大孔吸附树脂1吸附萃取液中的蛋白质、多糖和色素等杂质，大孔树脂2吸附、分离奈马菌素等多个步骤才能使奈马菌素从纯度58％-59％的粗品达到纯度90％以上。

在这些现有技术中，有的纯化方案仅能得到纯度较低的奈马菌素粗品，产品的纯度不能达到后续高效生产莫西菌素的要求，因而需要进一步提高其纯度以满足要求。有的则工序复杂，须经过脱色、萃取、吸附等诸多步骤，并且所用的淋洗液体积较多，有机溶剂比例较大，成本较高，对人体和环境有一定影响，因而需要进一步减少工序及有机溶剂的用量，以达到环境友好、纯度高、回收率高的奈马菌素纯品以满足后续要求。

发明内容

本发明的目的是提供一种用高效液相色谱纯化奈马菌素的方法，不仅能达到高的纯度和回收率，而且流动相使用量小，纯化时间短，工艺步骤少，从而大大缩短生产周期。

为达到上述目的，本发明的技术方案是：一种用高效液相色谱纯化奈马菌素的方法，所述方法是用苯乙烯-二乙烯基苯交联的微球为色谱填料，将奈马菌素粗品溶液上样到色谱柱后，以酸性醇水溶液为流动相洗脱吸附在填料上的奈马菌素。

优选的，所述苯乙烯-二乙烯基苯交联的微球是UniPS30-300或者UniPS40-300。

优选的，所述奈马菌素粗品用甲醇水溶液或者乙醇水溶液溶解。

优选的，所述酸性醇水溶液流动相为pH在2-3的乙醇和pH在2-3的酸溶液。

优选的，所述奈马菌素粗品的纯度在55％-70％。

优选的，所述流动相洗脱吸附在填料上的奈马菌素过程：先用68-72％的酸性乙醇水溶液洗杂9-10个柱体积，然后再用78-80％的酸性乙醇水溶液洗脱目标组分8-9个柱体积，最后用90％-95％的酸性乙醇水溶液2个柱体积清洗残留组分。

优选的，所述方法在装柱和纯化过程中的压力均小于4Mpa。

UniPS30-300和UniPS40-300是苯乙烯-二乙烯基苯交联的聚合物微球，孔径粒径分别为30±1.5μm和40±1.5μm，具有高度的粒径均一性。其作为色谱填料具有耐酸碱、寿命长、反压低，并且载量高、分离效果好等优点。

在纯化奈马菌素时，以UniPS40-300作为色谱柱的固定相，只需要一步即可将奈马菌素粗品纯度从65％-68％提高到90％以上，且回收率在70％以上，同时具有很好的脱色效果。本分离纯化方法兼顾了产品的纯度和回收率，是一种非常实用、快速的分离纯化奈马菌素的方法，适合工业化生产推广。