[发明专利]明日叶的提取液在改善胰岛素抵抗的药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物制药及分子生物学技术领域。

背景技术

根据记载，明日叶是芹科当归属植物，因其生命力顽强，今日摘叶明日可发新芽，故名明日叶。民间有直接食用，以提高人体免疫力等说法。但是，直接简单食用的方法是不能有效吸收其中的查耳酮和香豆素类化合物成分的。

经研究，明日叶的主要成分为查耳酮和香豆素类化合物，在抗肿瘤、抗氧化、降血压、降血糖等方面作用显著。

发明内容

本发明目的就是提出充分利用明日叶的提取液，以改善胰岛素抵抗的药物，提高疗效。

本发明将新鲜明日叶浸泡在70%的乙醇液中，过夜后，升温至80至90℃，保温5小时，然后过滤，取滤液进行旋蒸，去除水和乙醇，得查尔酮、香豆素。

采用本方法，可简单而有效地从植物明日叶中提取出主要成分：查尔酮和香豆素，以利于人们充分利用。也可在制备改善胰岛素抵抗的药物中的应用，能够影响在体肠促胰素分泌细胞的组织学分布和功能水平。

具体实施方式

1、摘取新鲜明日叶，浸泡在70%的乙醇液中，过夜后，升温至80至90℃，保温5小时，然后过滤，取滤液进行旋蒸，去除水和乙醇，得查尔酮、香豆素。

2、以明日叶提取物为研究对象，应用糖尿病小鼠和胰岛素抵抗大鼠，证实了明日叶具有显著降糖作用，以及改变肠促胰素分泌细胞的组织学分布和功能水平从而改善胰岛素抵抗，为改善胰岛素抵抗药物研究提供了新的效果显著的药物。

雄性小鼠禁食不禁水12h后，80mg/kg尾静脉注射四氧嘧啶，1-3h内灌胃50%葡萄糖。72h后，毛细管眼后静脉丛采血，用血糖仪检测动物血糖，血糖≧11.1mmol/L为造模成功，造模成功小鼠随机分为模型组、盐酸二甲双胍组、明日叶组（生药给药量10g/kg）另取十只正常小鼠作为正常对照组。受试药小鼠灌胃给药28.5ml/kg，折合成相同的生药剂量10g/kg，阳性对照组：灌胃150mg/kg盐酸二甲双胍，正常对照组和模型组给予同量生理盐水。每天一次，连续7天。末次给药前禁食8h，测定给药前及末次给药后0.5h、1h、2h、4h的血糖值。

实验结果显示，模型组与正常对照组相比较，血糖水平显著升高，表明造模成功。与模型组比较，明日叶提取物在给药7天后，末次给药前（0h）就能显著性改变血糖水平，末次给药后2h、4h能极其显著的改变血糖水平。

3 明日叶提取物对胰岛素抵抗大鼠作用的研究

(1) 受试物：结合参考文献，确定明日叶黄酮组分提取最佳工艺参数，制备明日叶醇提物。罗格列酮为阳性对照药。

(2) 动物造模：应用SD雄性大鼠，分为正常对照组和模型组，正常组大鼠给予正常饲料，模型组大鼠给予高糖高脂饲料喂养12周，12周后大鼠禁食12h测定空腹血糖及胰岛素，再灌服葡萄糖溶液（2g/kg）分布于0、30、60、90、120、180min测血糖，以口服糖耐量水平及胰岛素抵抗系数评价胰岛素抵抗大鼠是否成模。

(3) 药理作用研究：取胰岛素抵抗大鼠随机分组，受试物灌胃4周。，测定并计算胰岛素抵抗系数；测定血清GLP-1、GIP水平；取肝脏，进行常规病理学制片、检验；取消化道十二指肠、空肠、回肠、结肠上中下段及直肠，进行K（GIP-IR）细胞、L细胞(GLP-1-IR)免疫组化染色。

（4）实验结果：与模型组相比较，灌胃给予高剂量明日叶提取物可以显著性的降低胰岛素抵抗大鼠的空腹血糖及空腹胰岛素水平，降低大鼠胰岛素抵抗系数值；调节胰岛素抵抗大鼠的肠促胰岛素分泌紊乱的状态，改善大鼠的胰岛素抵抗症状。肝脏病理检查显示，肝脏损伤状况有所改善，组织HE染色显示即有局灶性肝细胞脂肪变性,呈以小泡性为主的混合性脂肪变性, 局部出现小叶内炎症细胞浸润。与模型组相比，灌胃给予罗格列酮或者高低剂量明日叶的大鼠消化道十二指肠、空肠、回肠、直肠段L细胞数量有所增加，但无显著性差异；结肠上、下段的L细胞数量增加，呈显著性差异；十二指肠、空肠段K细胞明显减少，呈显著性差异；回肠、结肠上下段及直肠段段的K细胞有所减少，但无显著性差异。