[发明专利]ORY-1001联合放疗和化疗用于治疗人三阴性乳腺癌的用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种小分子药物ORY-1001联合放射疗法和/或化疗用于治疗乳腺癌，特别是人三阴性乳腺癌的用途。

背景技术

人赖氨酸特异性去甲基化酶(Humanlysinespecificdemethylasel，LSD1)是胺氧化酶家族成员之一，在黄素腺嘌呤二核苷酸(Flavinadeninedinucleotide，FAD)的参与下，LSD1特异性地去除组蛋白H3上第四位(H3K4)和第九位(H3K9)赖氨酸残基上的二甲基和一甲基修饰^[1]。此外，LSD1还能去除其它一些非组蛋白底物上的甲基化修饰，例如p53、DNMT1和E2F1等^[2,3]。LSD1在多种肿瘤中高表达，包括前列腺癌、未分化的成神经细胞瘤、雌激素阴性的乳腺癌^[4]、膀胱癌和结直肠癌等。LSD1高表达与基底样乳腺癌细胞差的预后相关，且对聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)抑制剂具有敏感性^[5]。同时我们实验也发现，过表达LSD1能够增强促进三阴性乳腺癌细胞生长和促进DNA双链断裂修复。因此，LSD1成为肿瘤等疾病的重要的、潜在的药物作用靶标^[6-8]。

因此，利用选择性强、高效、低毒的去甲基化酶抑制剂来抑制LSD1功能是治疗肿瘤的一种新途径。目前LSD1的抑制剂主要有反苯环丙胺类抑制剂、底物多肽类似物和多胺类LSD1小分子抑制剂等。由于LSD1属于胺氧化酶家族，因此胺氧化酶的抑制剂被首先用来考察是否抑制LSD1。最早发现的LSD1抑制剂为反苯环丙胺又名强内心百乐明(tranylcypromine,TCP，结构见图1)，TCP在临床上被用来治疗抑郁症，它能够抑制LSD1活性，但是其对胺氧化酶家族的选择性较差。由ORYZONGenomicsS.A.公司开发的高度选择性、强劲的LSD1抑制剂ORY-1001，其IC₅₀<20nM，结合LSD1能力是TCP的100倍，结构见图2。它是一个LSD1选择性抑制剂，对其它依赖FAD的氧化酶类(MAO-A/B,IL4I1,KDM1B>100μM,SMOX7μM)没有显著的抑制活性。用该化合物处理急性髓性白血病中的THP-1细胞，能够剂量依赖的促进THP-1细胞分化，并进一步促进细胞调亡。ORY-1001能够抑制急性慢性白血病MV(4；11)细胞的增殖和克隆形成，还能显著地抑制接种MV(4；11)小鼠模型的肿瘤生长^[6,9]。

2014年，欧洲药品管理局(EuropeanMedicinesAgency，EMA)批准了第一个LSD1特异型抑制剂ORY-1001进行I/IIA期临床试验，用于治疗急性髓系白血病(AML)^[10]。药物抑制LSD1后会影响细胞多个基因的表达，使得白血病母细胞转变为正常分化细胞，同时也降低了白血病干细胞的增殖和存活能力。ORY-1001能够显著地降低急性淋巴白血病(ALL)小鼠模型中肿瘤细胞的负荷和延长小鼠的存活时间。三阴性乳腺癌(triplenegativebreastcancer,TNBC)为雌激素受体(estrogenreceptor,ER)、孕激素受体(erogesteronereceptor,PR)和人表皮生长因子受体2(HER-2)均阴性表达的乳腺癌，约占乳腺癌的10％-22％，被认为是一种独立的临床病理类型，具有侵袭性强、预后差和缺乏特异性治疗方法等特点^[11]。鉴于以上ORY-1001对白血病细胞强的抑制作用，我们认为有必要在三阴性乳腺癌细胞系中系统研究ORY-1001对放射治疗和联合紫杉醇化疗在临床前的作用，为以后开展该药物对三阴性乳腺癌临床应用提供临床前的相关实验基础和技术指导。

之前我们发明了一种连续低剂量辐射富集乳腺癌干细胞的方法(CN104152434A)。在该研究基础之上，我们增加ORY-1001药物处理，然后进行连续低剂量辐射，利用细胞克隆形成实验和流式细胞技术FACS筛选标记的乳腺癌干细胞技术，研究ORY-1001是否影响由连续低剂量辐射富集得到的乳腺癌干细胞的比例和它们的辐射抗性，这对于该药物能否用于以后乳腺癌临床辐射治疗有着重要的指导意义。