[发明专利]诱导人干细胞向肝细胞定向分化的新方法

权利要求书

1.一种用于诱导人干细胞向肝细胞定向分化的培养基，其特征在于，所述的培养基包括：细胞分化基本培养基；以及以下小分子化合物：

GSK3β抑制剂：终浓度为0.5-8 uM；

TGFβ抑制剂：终浓度为0.5-10 uM；和

维甲酸类化合物：终浓度为0.01-10 uM；

所述培养基不包括所述小分子化合物以外的其它诱导剂，其能够诱导人干细胞向肝细胞定向分化，获得人肝前体细胞或肝成熟细胞；

其中所述的人干细胞为具有多向分化潜能的人源干细胞。

2.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，其中：

GSK3β抑制剂：终浓度为0.5-5 uM；

TGFβ抑制剂：终浓度为0.5-8 uM；和

维甲酸类化合物：终浓度为0.1-5 uM。

3.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，其中：

GSK3β抑制剂是CHIR-99021，其终浓度为0.5-8 uM；

TGFβ抑制剂是SB431542或/和A83-01，其终浓度为0.5-10 uM；

维甲酸类化合物是维甲酸，其终浓度为0.01-10 uM。

4.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述的培养基中，GSK3β抑制剂、TGFβ抑制剂和维甲酸类化合物以摩尔比或重量比(0.5-8)：(0.1-10)：(0.01-10)存在。

5.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述的培养基中，GSK3β抑制剂、TGFβ抑制剂和维甲酸类化合物以摩尔比或重量比(0.5-5)：(0.5-8)：(0.1-5)存在。

6.如权利要求1-5任一所述的培养基，其特征在于，所述的GSK3β抑制剂包括：CHIR-99021、BIO、IM-12或TWS119。

7.如权利要求1-5任一所述的培养基，其特征在于，所述的TGFβ抑制剂包括：SB431542、A83-01、SB525334、LY2109761或RepSox。

8.如权利要求1-5任一所述的培养基，其特征在于，所述的维甲酸类化合物是天然或人工合成的，包括：维甲酸、13-顺式维甲酸或9-顺式维甲酸。

9.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述细胞分化基本培养基为在基础细胞培养基中加入0.25～0.75% N2、0.5～1.5% B27、0.5～1.5% Non-AA、0.5～1.5% Sodiumpyruvate。

10.如权利要求9所述的培养基，其特征在于，所述细胞分化基本培养基为在基础细胞培养基中加入0.5% N2、1% B27、1% Non-AA、1% Sodium pyruvate。

11.如权利要求10所述的培养基，其特征在于，所述的基础细胞培养基包括：DMEM/F12、MEM、DMEM、RPMI1640、Neuronal basal或Fischers。

12.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述具有多向分化潜能的人源干细胞为：人胚胎干细胞、诱导多能干细胞、间充质干细胞、脂肪干细胞或脐血干细胞。

13.GSK3β抑制剂、TGFβ抑制剂和维甲酸类化合物所构成的小分子化合物的组合物，或权利要求1-11任一所述的培养基的用途，其特征在于，用于诱导人干细胞向肝细胞定向分化，获得人肝前体细胞或肝成熟细胞；其中所述的人干细胞为具有多向分化潜能的人源干细胞。

14.如权利要求13所述的用途，其特征在于，所述具有多向分化潜能的人源干细胞为：人胚胎干细胞、诱导多能干细胞、间充质干细胞、脂肪干细胞或脐血干细胞。