[发明专利]MIP3α-Fc融合蛋白及其用途

说明书

本发明提供了一种MIP3α‑Fc融合蛋白，所述的融合蛋白为巨噬细胞炎性蛋白MIP3α和Fc的二聚体融合蛋白，所述的MIP3α与Fc之间通过免疫球蛋白的铰链区或柔性肽段连接。本发明提供了一种长效的MIP3α‑Fc融合蛋白。这种新型融合蛋白，在体内外都体现出良好的生物活性和稳定性，能够趋化未成熟的树突状细胞，瘤内注射MIP3α‑Fc融合蛋白能有效抑制肿瘤的生长，同时具有长效血浆半衰期。

技术领域

本发明涉及一种MIP3α-Fc融合蛋白及其编码核苷酸序列、以及该融合蛋白的制药用途，属于基因工程技术领域。

背景技术

树突状细胞（DC细胞）是机体功能最强的专职抗原递呈细胞，它能高效地摄取、加工处理和递呈抗原，诱导特异性的细胞毒性T淋巴细胞生成，在启动、调控、并维持免疫应答的过程中处于中心环节。近年来大量的研究表明，通过肿瘤相关抗原负载树突状细胞，回输或免疫接种于载瘤宿主，可诱发特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL)的抗肿瘤免疫反应。同时树突状细胞与肿瘤的发生、发展有着密切关系，大部分实体瘤内浸润的树突状细胞多，相对应患者的预后也更好。因此，设法提供肿瘤浸润性树突状细胞的量，从而诱导针对肿瘤细胞的特异性免疫应答，是一种有效的治疗肿瘤的手段。

趋化因子是一类控制细胞向炎性部位迁移的细胞因子，通过与其相应受体的结合，调控免疫细胞分化、发育及定向迁移过程。巨噬细胞炎性蛋白MIP-3α（macrophageinflammatory protein-3α），又称趋化因子20（CCL20），属CC类趋化因子。MIP-3α是目前最强的趋化树突状细胞的趋化因子，其特异性受体CCR6高表达于未成熟的DC细胞（imDCs)。这种未成熟的DC细胞捕获抗原后转而表达CCR7，分化成为成熟的树突状细胞。利用MIP-3a的这一特性，Fushimi等人将编码MIP-3α的基因通过腺病毒转染至小鼠黑色素瘤等四种恶性肿瘤中，结果这四种组织中都检测到DC细胞的聚集，并且三种肿瘤生产受到明显抑制。王甲南等人在小鼠肝癌模型上瘤内注射MIP-3α蛋白，明显抑制了肝癌的生长。

然而，直接利用基因治疗疾病的，目前尚未有临床应用，这主要涉及安全性问题。将外源的基因导入生物细胞内必须借助一定的技术方法或载体，如Fushimi等人利用的腺病毒。问题是由于病毒自身含有病毒蛋白及癌基因，就有使宿主细胞感染病毒和致癌的危险性。此外，无论哪种技术方法，外源基因都应导入靶体细胞内染色体特定基因座位，否则可能会导致正常细胞的基因突变，而目前尚未有成熟的方法解决这一问题。因此使用重组蛋白来进行相关疾病的治疗是更为合理的方法。但普通重组的MIP-3α蛋白的体内半衰期非常短，需要大剂量频繁给药，这大大限制了其临床应用价值。

发明内容

本发明的目的是克服普通重组MIP-3α蛋白体内半衰期短的不足之处，提供一种MIP3α-Fc融合蛋白及其用途。

本发明的MIP3α-Fc融合蛋白，所述的融合蛋白为巨噬细胞炎性蛋白MIP3α和Fc的二聚体融合蛋白，所述的MIP3α与Fc之间通过免疫球蛋白的铰链区或柔性肽段连接。

所述MIP3α选自人或小鼠MIP3α；所述的Fc选自人或小鼠的IgG、IgA、IgE、IgM及它们的亚型；所述Fc选自天然型或突变型免疫球蛋白Fc段。

所述的MIP3α为人MIP3α，其氨基酸序列如 SEQ ID.1所示，所述的Fc为人IgG1-Fc，含铰链区的的Fc的氨基酸序列如 SEQ ID.2所示，所述的融合蛋白单链的氨基酸序列如SEQ ID.3所示，第70-71位氨基酸残基为连接肽段。

所述的MIP3α为小鼠MIP3α，其氨基酸序列如 SEQ ID.4所示，所述的Fc为小鼠IgG2a-Fc，含铰链区的Fc的氨基酸序列如 SEQ ID.5所示，所述的融合蛋白单链的氨基酸序列如 SEQ ID.6所示，第70-71位氨基酸残基为连接肽段。

本发明提供了编码融合蛋白的DNA分子，所述的DNA的核苷酸序列如 SEQ ID.7所示。或如 SEQ ID.8所示。