[发明专利]垂枝樱花的组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及一种垂枝樱花的组织培养方法。

背景技术

樱花传统的繁殖方式为嫁接繁殖，但其成苗慢，难以大量快速生产。随着组织培养技术的发展，组织培养为樱花的快速繁殖和工厂化生产提供了一条有效途径。国内学者对樱花的研究主要集中在山樱花、东京樱花、福建山樱花、野山樱等种类和品种上。垂枝樱花为近年来才发展起来的观赏樱花，由于其枝条柔垂飘逸、美观，越来越多的应用于园林绿化和美化中。

对于垂枝樱花组织培养方面的研究主要有：南京林业大学荣冬青等报道了垂枝早樱“红枝垂”的组培技术，以带芽茎段为外植体，启动培养基为MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，芽的诱导率为80％；增殖培养基为MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖35g/L，增殖系数为4.15；生根培养基为1/2MS+NAA1.0mg/L+IBA1.0mg/L，生根率达95％(荣冬青，王贤荣.垂枝早樱“红枝垂”的组培快繁试验.林业科技开发，2008)。

徐兆波等人也就垂枝樱花的引种观察与繁殖技术进行了研究，繁殖技术中组织培养仅就垂枝樱花抗寒砧木的组培进行了研究，采用的繁殖材料为休眠芽和萌动芽，但研究中未形成完整植株(徐兆波，陈秀云等.垂枝樱花引种观察与繁育技术研究.莱阳农学院学报，2001)。

综上所述，目前对于垂枝樱花的组织培养方法的研究报道较少，且不系统，并且存在繁殖系数不高的一些问题。究其原因，在樱花的组织培养过程中，大部分种类或品种都会遇到节间不伸长，容易老化，或出现叶片卷曲，玻璃化等现象，只有此问题彻底解决，才能使组培达到较好的效果。

发明内容

本发明的目的是提供一种垂枝樱花的组织培养方法，以克服现有垂枝樱花的组织培养中存在的节间缩短，增殖系数低的问题。

为达到上述目的，本发明是通过以下的技术方案来实现的：

本发明所述的垂枝樱花的组织培养方法，包括：外植体的准备、启动培养、增殖培养和生根培养；所述增殖培养的培养基含有6-BA0.2～0.5mg/L、NAA0.03～0.07mg/L和GA5～15mg/L。

本发明改良增殖培养基配方，能够解决垂枝樱花中普遍存在的节间缩短、繁殖系数低的问题，优选的，所述增殖培养的培养基的配方为：MS+6-BA0.2～0.5mg/L+NAA0.03～0.07mg/L+GA5～15mg/L+蔗糖30～40g/L+琼脂5～8g/L。

进一步优选的，所述增殖培养的培养基中，6-BA的浓度为0.3～0.5mg/L，NAA的浓度为0.05mg/L，GA的浓度为10mg/L。更进一步的，所述增殖培养的培养基中，6-BA的浓度为0.3mg/L或0.5mg/L。

优选的，所述的外植体为带腋芽茎段或茎尖，取自当年生春稍枝条的中上部。

消毒后，对茎尖基部、带腋芽茎段的两端切口进行修剪，修剪成1～1.5cm的单芽茎尖或单芽茎段进行启动培养。

优选的，所述启动培养的培养基的配方为：

MS+BA0.4～0.6mg/L+NAA0.03～0.07mg/L+蔗糖30～40g/L+琼脂5～8g/L。

进一步优选的，所述启动培养的培养基中，6-BA的浓度为0.5mg/L，NAA的浓度为0.05mg/L。

增殖培养基和启动培养基中，蔗糖的浓度具体可以为30g/L，琼脂的浓度具体可以为6.5g/L。

优选的，所述增殖培养的方法包括：启动培养20～30天后，从组培苗上取1～2cm的单芽茎段，垂直接种于培养基中进行培养。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明垂枝樱花的组培方法具有较低的污染率，启动效果好，启动培养的诱导分化率可达到84％，增殖培养阶段能够正常拔节，组培苗生长健壮，解决了传统樱花组织培养过程中普遍出现的节间缩短，容易老化的问题，且增殖系数可达到7.0。

附图说明

图1为实施例1对外植体进行消毒灭菌的图片；

图2为实施例1外植体接种到启动培养基时的图片；

图3为实施例1启动培养10天的图片；

图4为实施例1增殖培养20天的图片；

图5为实施例1增殖培养25天的图片；

图6为实施例1生根培养20天全株的图片；

图7为实施例1生根培养20天根部的图片；

图8为实施例2采用仅添加6-BA0.5mg/L和NAA0.05mg/L两种植物生长调节剂的培养基进行增殖培养20天的图片。