[发明专利]一种野生巴楚蘑菇菌丝的分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明属于野生蘑菇菌丝分离纯化技术领域，具体涉及一种野生巴楚蘑菇菌丝的分离纯化方法。

背景技术

新疆野生食用菌资源相对较少，著名的食用菌除了羊肚菌、阿魏蘑外，还有在喀什地区的“巴楚蘑菇”。它以质嫩味美、营养丰富而著称。因巴楚蘑菇迄今为止未被驯化成功，随着人们对具有特色香味和鲜味巴楚蘑菇及营养的认识，需求量日益增加，市场价格大幅增长，野生数量由于当地人们灭绝性的采集而逐年降低，这种状况严重威胁巴楚蘑菇物种的存亡。

但经多年的研究发现，巴楚蘑菇菌丝纯化难度极大，多数分离的菌丝是混合了杆状和镰刀状两种杂菌的杂合菌丝，由此导致研究不能继续深入。找到一种能够纯化巴楚蘑菇菌丝的新方法成了深入研究巴楚蘑菇的瓶颈。

所以，在传统的菌丝分离中引进更为有效、准确的野生巴楚蘑菇菌丝分离和纯化的技术和方法对于巴楚蘑菇物种的保存以及消费者的需求是有着非常重大的意义的。

发明内容

本发明的目的是提供一种野生巴楚蘑菇菌丝的分离纯化方法，该方法通过野生的巴楚蘑菇组织或孢子分离培养、纯化培养等步骤，实现了野生巴楚蘑菇菌丝的分离和纯化，具有纯化度高，纯化准确、易于准确鉴定的优点。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

一种野生巴楚蘑菇菌丝的分离纯化方法，其步骤包括：

(1)、将野生巴楚蘑菇组织或弹射的孢子于PDA培养基上培养6-8天获得杂合菌丝；

(2)、取步骤(1)中的杂合菌丝于特色培养基上培养7-10天，获得单一的纯合丝状菌丝；优选的，本步骤的培养温度为20-25℃。

(3)、挑取步骤(2)中的菌丝转接到PDA培养基上培养6-8天即可。

所述步骤(1)中，野生巴楚蘑菇组织为野生巴楚蘑菇子实体的菌肉；将菌肉或弹射的孢子，在开放环境下放置于灭菌的PDA培养基上，25℃条件下，室内培养7天。优选的，所述野生巴楚蘑菇子实体的菌肉与PDA培养基的培养重量为1:90-100；所述野生巴楚蘑菇弹射的孢子无菌水的接种量为0.1-0.5‰。经过7天的培养后有菌丝长出，取长出的菌丝于事先滴有蒸馏水或5％KOH溶液的盖玻片上，盖上盖玻片，在显微镜下观察菌丝情况，发现有三种菌丝形态，一种丝状，一种镰刀状，另一种为杆状，所以，经过步骤(1)的培养，培养出的菌丝为杂合菌丝。

优选的，所述野生巴楚蘑菇子实体的菌肉为菌柄与菌盖结合部，其组织生长活跃，不与外部空气接触。

PDA培养基的配方为马铃薯(去皮)200g、葡萄糖20g、琼脂15-20g，蒸馏水1000mL。

所述步骤(2)中，特色培养基由葡萄糖、硫胺素、硫酸庆大霉素、青霉素、新霉素和蒸馏水组成。优选的，所述特色培养基的葡萄糖浓度为0.02g/mL；所述特色培养基中的的硫胺素、硫酸庆大霉素、青霉素、新霉素的浓度均为0.001mg/mL。

所述特色培养基的配置方法为，将葡萄糖、琼脂和蒸馏水灭菌后倒入平皿，冷却至60℃以下后加入硫胺素、硫酸庆大霉素、青霉素和新霉素，混合均匀倒入平板至凝固待用。

该特色培养基的优点在于能抑制镰刀状和杆状以及细菌等杂菌的生长而不阻碍丝状菌丝的生长，便于丝状真菌菌丝的快速生长和分离。

所述步骤(2)中，杂合菌丝的接种量为1-2‰。合适的杂合菌丝接种量，有利于所要的菌丝快速生长，快速分离。

所述步骤(3)中，菌丝的接种量为1-2‰。选择合适的接种量再次纯合培养，有利于所要分离的菌丝更快速的生长，恢复其原有的活力。

将步骤(3)中获得的纯合丝状菌丝通过显微镜检和分子序列鉴定进行纯合鉴定，镜检和序列比对相符即已纯化，反之则不纯。

1、本发明提供了野生巴楚蘑菇菌丝纯化方法，采用改良的CTAB法提取纯化后的DNA，并进行ITS序列测序，得到的序列和已知的巴楚蘑菇子实体的ITS序列进行比对，序列相似度达99％以上，为人工培养巴楚蘑菇奠定了基础。

2、本发明提供的野生巴楚蘑菇菌丝的分离纯化方法，具有纯化性高、纯化精确、易于准确鉴定的特点。

3、本发明的野生巴楚蘑菇菌丝纯化工艺简单、易于操作、适用性强。

附图说明

图1为实施例1中的杂合菌丝图。

图2为实施例1中的单一的纯合丝状菌丝图。

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明作进一步说明：

实施例1