[发明专利]一种从鱼类历史标本中提取DNA的方法

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及从鱼类历史标本中提取DNA的方法。

背景技术

我国地形地貌复杂，湖泊众多，分布在我国的鱼类资源十分丰富，但因环境变化及人为影响，很多鱼类物种资源在我们人类还没来得及认识就消失了，只剩下早期留下的浸泡标本，成为证明它们存在的唯一线索。分子生物学技术发展为探索这些鱼类物种资源提供了新的途径，获取DNA是开展分子生物学研究的第一步，但从经过长时间浸泡的标本中提取DNA也成了研究这些鱼类的首道屏障。

经过长时间浸泡后，不仅细胞结构发生了变化，细胞内的大分子物质已经降解或者正在降解，为了得到相对完整的DNA序列，人们在DNA析出和纯化过程中花费了大量的精力和时间，却忽略了材料的预处理步骤，大多只是进行简单的清洗就进入了破碎环节。

发明内容

为解决上述问题，在对酒精浸泡的历史标本进行DNA提取时，加入预处理环节，主要包括以下6个步骤：

（1）将组织材料放于70%的酒精中浸泡20分钟以上；

（2）将组织材料转于50%的酒精中浸泡15分钟以上；

（3）将组织材料转于30%的酒精中浸泡10分钟以上；

（4）将组织材料转于10%的酒精中浸泡10分钟以上；

（5）将组织材料转于无菌水中浸泡10分钟以上；

（6）将组织材料转于TE缓冲液（10mMTris-HCl和1mMEDTA，pH8.0）中浸泡10分钟以上；

以上各步骤中，液体的体积至少是所处理材料体积的10倍以上。

进一步，步骤（1）的浸泡时间为40-60分钟。

进一步，步骤（2）的浸泡时间为30-40分钟。

进一步，步骤（1）的浸泡时间为40分钟，步骤（2）的浸泡时间为40分钟，步骤（3）-（6）的浸泡时间为10分钟。

经研究发现，将酒精中的标本进行预处理，用酒精水溶液逐步置换出标本组织中的酒精，再将标本组织转移至TE缓冲液中，还原至近似体液中的细胞后再进入破碎环节，能提高DNA的产量和质量。

经过上述处理后，从酒精浸泡的历史标本中提取的DNA产量和质量都有很大的提高。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明做进一步说明。

取酒精浸泡60年的鲤科鱼类标本2克，进入下列处理程序：

（1）将组织材料放于50毫升70%的酒精中浸泡40分钟；

（2）将组织材料转于50毫升50%的酒精中浸泡40分钟；

（3）将组织材料转于50毫升30%的酒精中浸泡10分钟；

（4）将组织材料转于50毫升10%的酒精中浸泡10分钟；

（5）将组织材料转于50毫升无菌水中浸泡10分钟；

（6）将组织材料转于50毫升TE溶液（10mMTris-HCl和1mMEDTA，pH8.0）中浸泡10分钟；

组织材料预处理后进入破碎和DNA提取的其它环节，最后得到了50ngDNA,平均长度达到4kb,与对照相比，产量提高了100%，长度增加了300%。