[发明专利]一种用于扩增鹅细小病毒基因组的引物

说明书

本发明提供了一种用于扩增鹅细小病毒基因组的引物扩增鹅细小病毒基因组的引物，所述引物序列为：上游引物GPVF：ACGTATTTCCGGCTGTTAGGTTGACCACGCGCAT；下游引物GPVR：TTGCGCGCCAGGAAGTGTTTTAT。本发明根据NCBI (National Center for Biotechnology Information）数据库中鹅细小病毒基因组结构特征，设计特异性的引物，设计一组基于鹅细小病毒全基因组的引物，将该引物的PCR经克隆测序后，根据鹅细小病毒基因组结构特性，即可获得鹅细小病毒全基因。该方法仅需一组引物即可获得鹅细小病毒全基因序列。

技术领域

本发明涉及一种用于扩增鹅细小病毒基因组的引物，属于兽医传染病学领域。

背景技术

鹅细小病毒（Goose parvovirus，GPV）属于细小病毒科（Family: Parvoviridae）、细小病毒亚科（Subfamily: Parvovirinae）、依赖病毒属（Genus: Dependovirus）只有一个血清型。

鹅细小病毒是感染禽类的主要自主复制型细小病毒，由我国学者方定一于1956年首先在江苏省扬州地区发现，以后在世界多国均见有相关研究报道。该病主要侵害30d以内的雏鹅和雏番鸭，引起以急性肠炎及肝、肾、心等实质脏器败血性病变，尤其是小肠部位的纤维性、栓塞性病变，是目前危害养鹅业和番鸭养殖业的重要疫病。

目前，关于GPV全基因序列仅有少量报道，相关文献获得GPV基因组序列需要多条引物，该病基因组测定的难点在于其其基因组5’端和3’端均含有相同的末端倒置重复序列（inverted terminal repeat，ITR）。本发明根据GPV基因组结构特征，设计一组引物，将该引物PCR扩增结果，经巧妙的拼接后即可获得GPV全基因组。本发明的建立可填补国内外相关领域空白。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于扩增鹅细小病毒基因组的引物。

为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

用于扩增鹅细小病毒基因组的引物包括：

1、一种用于扩增鹅细小病毒基因组的引物，其特征在于，所述引物序列如下：

上游引物GPVF：ACGTATTTCCGGCTGTTAGGTTGACCACGCGCAT；下游引物GPVR：TTGCGCGCCAGGAAGTGTTTTAT，利用本发明的引物所扩增获得的PCR产物，经克隆测序后，根据克隆测序的结果和鹅细小病毒基因组结构特征，对获得序列进行分段，即可获得鹅细小病毒全基因组序列。

具体操作方法如下：

1、引物设计：

参考鹅细小病毒全基因组结构特征，利用引物设计软件Oligo 7，设计特异性引物，采用BLAST工具进行检索，验证其特异性。上游引物GPVF：ACGTATTTCCGGCTGTTAGGTTGACCACGCGCAT；下游引物GPVR：TTGCGCGCCAGGAAGTGTTTTAT。以鹅细小病毒株（GenBank登录号HQ891825）为例，上游引物位于基因组168-201位，下游引物位于4657-4679位。

2、目的条带的PCR扩增与克隆