[发明专利]一种金线莲种苗的扩繁方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种金线莲种苗的扩繁方法，属于金线莲种苗高效扩繁育苗技术领域。

背景技术

金线莲(Anoecthilus roxburghii)为兰科开唇兰属多年生草本植物，别名为金线兰、金丝草、树草莲、金线虎头蕉等。通常生长在荫蔽阔叶林下的肥沃腐叶土中，是我国传统的珍贵药材，有清凉解毒、滋阴降火、消炎止痛的功效，且无毒副作用，在民间素有“药王”的美誉。金线莲株高8～20cm，株型小巧，叶型优美，叶脉金黄色、呈网状排列，又是观赏价值极高的室内观叶珍品。随着信息社会的日益发达，金线莲的功效被越来越多的医学家们的认可和推崇。但是金线莲种子微小，胚发育不完全，在自然条件下极难出芽，对生长环境的要求极为苛刻，生长缓慢，天然产量极低。若以分根或扦插繁殖，则耗时长且繁殖系数低，而且金线莲赖以生存的自然环境发生变化，野生资源锐减，加之长期采挖，种质资源稀缺，已濒临灭绝，已不能满足临床需求。目前福建台湾等地虽有一批专业种植户涌现，但是其栽培种植工艺保守，导致金线莲培育效率低下，产量无法满足国内需求。目前在江浙地带，金线莲的需求量日益增长，巨大的市场需求无法得到满足，在利益驱动下，产生了一些非正常的金线莲育苗手段，导致金线莲产品更加良莠不齐。

应用植物组培快繁方法在一定程度上解决了金线莲种苗短缺的现象，有关金线莲的快速繁殖技术国内多有报道。但是现有的应用植物组培的方法生产金线莲种苗，消耗大量的人力、物力，生产成本居高不下，且培养周期长，种苗质量不高，仍不能满足药农的需求。另外在中国专利文献CN101213942A中披露了一种药用金线莲组织培养一步成苗快速繁殖方法，但是培养时间过长，效率低下。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的不足，提供一种金线莲种苗的扩繁方法，该扩繁方法步骤简单，生产周期与传统工艺相比大幅减短，成本也降低，对环境友好，适合工业化生产，既能够大幅度提高金线莲的种苗培育效率，又可以提高整个市场金线莲产品的质量。

按照本发明提供的技术方案：一种金线莲种苗的扩繁方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)外植体的培养和接种：挑选高度为7～10cm、带有4～6片叶、具有3～4节间的成年金线莲原种植株，在至少连续三个太阳照射之后的晴天，采集整株植株作为外植体，先用碱性清洁剂清洗，再用清水反复冲洗至无泡沫为止；然后将外植体灭菌，灭菌后无菌切去叶片、顶芽和根须，切1～2节间为一段，接种到J1固体培养基中，进行诱导休眠芽生长，诱导培养条件为：光照强度3000～5000Lx，光照时间16～18小时/天，温度22～28℃，培养时间35～45天；休眠芽诱导成功后，挑选强壮的植株作为扩繁种苗；

(2)通过摇床进行高效率扩繁：将扩繁种苗移入到J2液体培养基中，放置于摇床上进行第一次继代培养，第一次继代培养条件为：摇床光照强度3000～5000Lx，温度22～28℃，摇动频率95次/分钟，培养时间20天；第一次继代培养获得扩繁比率为1：(20～30)的胚芽体，然后将胚芽体切分为2～3个主苗，发芽较多的主苗留在摇床上用新的J2液体培养基继续培育新芽，进行第二次的继代培养，其余主苗移入J1固体培养基作种植前期培养；

(3)固体培养基内生长培养：移入J1固体培养基中的主苗作种植前期培养，培养条件为：光照强度3000～5000Lx，光照时间16～18小时/天，温度22～28℃；每35天继代培养1次，每次继代培养时都有一部分主苗长成3～5cm高的成熟种苗，成熟种苗移入J3固体培养基作生根培养；其余主苗继续在J1固体培养基中进行生长培养；

(4)固体培养基内生根培养：移入J3固体培养基中的成熟种苗作生根培养，培养条件与步骤3中生长培养条件相同或直接连瓶移入种植大棚苗床上培养，培养35～45天即可见生出大量根须，此时便可开始炼苗；

(5)炼苗及种植：将生出大量根须的成熟种苗放置于种植大棚苗床上，每天打开瓶盖1～2次，过10～15天后取出，将培养基洗净，即可进行种植。

作为本发明的进一步改进，所述步骤(1)中外植体灭菌的方法为：在超净工作台范围内，先将冲洗干净的外植体泡在50％(w/v)乙醇溶液中浸润5秒，然后迅速捞出，放在0.1％(w/v)升汞溶液中浸泡12分钟，最后用无菌水冲洗至少3遍后，控干水分。