[发明专利]一种新的农杆菌介导的大白菜原位转基因方法在审
| 申请号: | 201510462294.4 | 申请日: | 2015-07-31 |
| 公开(公告)号: | CN105087641A | 公开(公告)日: | 2015-11-25 |
| 发明(设计)人: | 孟平红;郭惊涛;邓英;蔡霞;李猛 | 申请(专利权)人: | 贵州省园艺研究所 |
| 主分类号: | C12N15/84 | 分类号: | C12N15/84;A01H5/00 |
| 代理公司: | 贵阳中新专利商标事务所 52100 | 代理人: | 李余江;程新敏 |
| 地址: | 550006 贵州省贵阳市小*** | 国省代码: | 贵州;52 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 杆菌 大白菜 原位 转基因 方法 | ||
1.一种新的农杆菌介导的大白菜原位转基因方法,其特征在于:
(1)配制农杆菌浸染液:挑取含有待转基因的单菌落,接种到含筛选抗生素的YEB液体培养基中,培养至OD600=0.6~0.8;取菌液稀释到无抗生素的YEB液体培养基中,培养至OD600=0.6~0.8时,离心处理,沉淀物用液体MS培养基将菌体重悬;
(2)大白菜原位转基因方法:大白菜于田间正常生长至开花始期,去除已开的花,保留花蕾,用镊子轻轻将花蕾剥开小口,将花序全部浸泡在上述农杆菌浸染液里2~4min;正常管理,采收种子;
(3)大白菜转化后代的抗性鉴定:将收获的大白菜种子播种于含抗生素的培养基MS+1mg/LBA上,挑选具有抗性的幼苗进行转化植株的分子检测;
(4)大白菜转化植株的分子检测:采集具有抗性的大白菜幼嫩叶片,用常规的CTAB法提取叶片DNA进行PCR检测;取PCR反应产物,用1%的琼脂糖凝胶进行电泳,如有待转基因的条带,则说明是转基因阳性植株,转化成功。
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