[发明专利]用于检测磺胺药物的试剂盒和试纸条及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析领域中用于检测磺胺药物的试剂盒和试纸条及其应用。

背景技术

磺胺药物是一类具有对氨基苯磺酰胺结构的化学药物，其中应用较广并有确切疗效的有数十种，由于其价格便宜、使用方便，广泛应用于动物疾病防治和促生长。磺胺药物的不合理使用在畜牧产品中产生了严重的残留现象，食品中残留的磺胺药物会危害人们的身体健康，长期摄入含有磺胺药物残留的食物可引起细菌耐药性增加，产生肾脏毒性，影响造血系统等毒副作用。

随着人们对食品安全的日益重视，欧盟、中国、美国、日本等国家相继对动物源性食品中磺胺药物最大残留限量值作出了规定，其中欧盟和中国规定磺胺药物总量的最高残留限量为100ppb。

目前磺胺药物的检测方法主要有仪器法(包括高效气相色谱、高效液相色谱以及色质联用技术等)、微生物法、免疫分析方法以及受体分析方法等，这些方法各有特点：仪器法准确、可靠、灵敏度高，是一种确证方法，但是不适合现场快速检测；微生物法可同时检测多种抗生素，但灵敏度不高、检测时间长，且无法定量；免疫分析方法基于抗原抗体的特异结合，具有灵敏度高、特异性强、可定量检测等优势，但由于灵敏度高且可识别同一类药物的抗体难以获得，制约了其在兽药残留检测领域中的应用。如能开发出可同时检测多种磺胺药物的产品将有助于磺胺药物的检测。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何检测多种磺胺药物。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了一种检测磺胺药物的试剂盒。

本发明所提供的一种检测磺胺药物的试剂盒，包括包被原和酶标记物；所述包被原为蛋白质flop；所述酶标记物是将标记酶和4-(4-氨基-苯磺酰胺基)苯甲酸偶联在一起得到的偶联物；所述蛋白质flop为如下a)或b)的蛋白质：

a)由SEQIDNo.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

b)将SEQIDNo.1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加由a)衍生的蛋白质。

上述试剂盒中，所述标记酶可为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酯酶；辣根过氧化物酶可采用现有技术中的多种方法将其与4-(4-氨基-苯磺酰胺基)苯甲酸进行偶联，如二环己基碳二亚胺偶联法等。

上述试剂盒还包括如下中的至少一种：磺胺二甲基嘧啶标准溶液、底物显色液、终止液、洗涤液、样品稀释液、包被缓冲液和封闭液。

上述试剂盒中，所述磺胺二甲基嘧啶标准溶液可以是一定浓度范围内的多种浓度的标准溶液，例如可以在0-100ng/mL之间，如磺胺二甲基嘧啶的浓度分别为50ng/mL、25ng/mL、12.5ng/mL、6.25ng/mL、3.125ng/mL和1.6ng/mL。

当标记酶为辣根过氧化物酶时，所述底物显色液由E液和F液组成，所述E液可为过氧化脲溶液或过氧化氢溶液(具体如质量百分含量为2％的过氧化脲溶液)，所述F液可为四甲基联苯胺溶液或邻苯二胺溶液(具体如质量百分含量为1％的四甲基联苯胺溶液)。所述终止液可为硫酸溶液，其浓度可为1-2M(如0.2M)。

上述试剂盒中，所述洗涤液为磷酸盐缓冲液，在本发明的一个实施例中，所述洗涤液具体为含有吐温20和叠氮化钠的浓度为0.01M，pH值为7.4的磷酸盐缓冲液；吐温-20在所述洗涤液中的体积含量为0.05％，叠氮化钠在所述洗涤液中的浓度为5mg/mL。

上述试剂盒中，所述包被缓冲液的pH为8.0，由溶剂和溶质组成，所述溶剂为水，所述溶质及其浓度为：20mMTris、30mMMgCl₂。

上述试剂盒中，所述封闭液为磷酸盐缓冲液；在本发明的一个实施例中，所述封闭液具体为pH7.4，含脱脂奶粉的浓度为0.02M的磷酸盐缓冲液；脱脂奶粉在所述封闭液中的浓度为20mg/mL。

所述包被缓冲液和所述封闭液也可以是本领域常用的其它包被缓冲液和封闭液。

上述试剂盒中，所述样品稀释液具体为pH值为8.0，由溶剂和溶质组成；溶剂为水，溶质及其浓度为：20mMTris、5mMMgCl₂、2％(质量百分含量)脱脂奶粉、1:1500(v/v)的6-羟甲基-7,8二氢蝶呤焦磷酸盐(DHPPP)。

为解决上述技术问题，本发明还提供了所述试剂盒的制备方法。

本发明所提供的所述试剂盒的制备方法，包括如下(1)或(2)的步骤：

(1)将所述包被原和所述酶标记物分别单独包装的步骤；