[发明专利]一种基于比色分析的免疫传感器的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种比色传感分析免疫传感器的制备方法及应用。具体是采用自制ITO传感平台构建了一种检测肿瘤标志物的比色传感器，属于新型生物传感检测技术领域。

背景技术

甲胎蛋白是一种常见的抗原。在甲胎蛋白的产生过程中，可能伴随着人体某些器官组织的病变，通常表现为肝癌、胰腺癌、肠胃管肿瘤等等。因此，在临床研究上，发展一种快速、简便、灵敏的检测甲胎蛋白的方法是十分重要的。

比色分析免疫传感器具有灵敏度高、可视化检测、操作简便、小型化、快速准确检测分析等优点，因此本发明制备了一种基于显色复合物的比色传感器，实现了对甲胎蛋白的检测。

目前已有的甲胎蛋白的临床检测方法很多，如放射免疫分析、化学发光免疫分析、酶联免疫分析等。比色传感分析是将免疫学方法与可视化比色方法相结合的一种生物传感器，通过抗原与抗体之间的特性性结合，使得它具有高灵敏性、高选择性、分析快速和实时监测等优点。

本发明采用显色复合物APTMS-GA为基底材料，利用夹心型的模式构建比色传感器，二抗标记物为AbAuN-TiO₂GO_x，实现了其对甲胎蛋白的成功固定，增强了传感器的灵敏度，扩宽了线性范围，有效地降低了传感器的检出限，并可以实现随时随地方便检测。该方法具有灵敏度高、特异性好、检测快速等优点，而且实现了实施检测，且不需要借助大型仪器，有效降低了传感器的制作及检测成本，有效克服了目前甲胎蛋白检测方法的不足。

发明内容

本发明的目的之一是基于显色复合物APTMS-GA为基底材料，构建了一种可以实时监测的比色免疫传感器。

本发明的目的之二就是将AuN-TiO₂用于孵化抗体，实现了甲胎蛋白的高灵敏检测。

本发明的目的之三就是可以将该比色免疫传感器用于随时随地的实时检测，达到灵敏监测的效果。

本发明的技术方案如下：

1.一种基于比色分析的免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）用质量分数为0.1%~10%的3-氨丙基三乙氧基硅烷APTES的甲醇溶液浸泡3mm×3mm的ITO玻璃24h，取出后洗涤；

（2）在ITO玻璃上滴加6μL、3-氨丙基三甲氧基硅烷-戊二醛显色复合物APTMS-GA，4oC冰箱中晾干；

（3）继续滴加6μL、1μg/mL~100μg/mL的甲胎蛋白抗体Ab，4oC冰箱中晾干，超纯水冲洗，再于4oC冰箱中晾干；

（4）继续滴加6μL、质量分数为0.1%~2%的BSA溶液，封闭玻璃表面上非特异性活性位点，4oC冰箱中晾干；

（5）继续滴加6μL、0.0001ng/mL~50ng/mL的一系列不同浓度的甲胎蛋白抗原标准溶液到ITO玻璃上，超纯水冲洗，4oC冰箱中晾干；

（6）继续滴加6μL的抗体孵化物AbAuN-TiO₂GO_x溶液，4oC冰箱中晾干，超纯水洗涤，4oC冰箱中晾干；

（7）继续滴加6μL、1~100mmol/L的葡萄糖溶液，充分反应；

（8）将修饰好的ITO依次放入微孔板中，4oC冰箱中晾干，制得比色免疫传感器。

2．如权利要求1所述的一种基于比色分析的免疫传感器的制备方法，所述的抗体孵化物AbAuN-TiO₂GO_x溶液，制备步骤如下：

（1）金纳米粒子的制备

取1~3mL、质量分数为1%的HAuCl₄溶液，用高纯水稀释至100~200mL，磁力搅拌，沸腾后加入1~15mL、质量分数为1%的柠檬酸钠，煮沸至酒红色不再改变，继续加热5min，室温冷却，制得金纳米粒子；

（2）负载标记物的N-TiO₂材料的制备

向锥形瓶中加入30mL、质量分数为99.5%的乙醇溶液，继续加入0.1~1.0g尿素，搅拌；向试管中加入0.1~2.5g的酞酸丁酯Ti(OBu)₄，430μL、质量分数为37%的盐酸；待试管中溶液混合均匀后，将试管中的混合液缓慢加入到尿素溶液中，溶液变成乳白色，搅拌14h；将溶液转移到反应釜中，130oC条件下加热1~10h，反应釜冷却后，将固体用乙醇洗涤，离心2次，在烘箱中干燥4~10h，将干燥后的白色固体用研钵研磨成粉末，放入瓷舟内，在200~600oC灼烧2h，冷却后得到N-TiO₂材料；