[发明专利]一种鱼类杀菌通透性增强蛋白及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体的说是一种鱼类(半滑舌鳎)杀菌通透性增强蛋白及其应用。

背景技术

杀菌通透性增强蛋白(bactericidal/permeabilityincreasingprotein,BPI)是脂质转移/脂多糖结合蛋白家族成员，其在化学结构上与脂多糖结合蛋白(lipopolysacchridebindingprotein,LBP)具有同源性。主要存在于哺乳动物中性粒细胞的嗜天青颗粒内，也可微量表达于单核细胞表面。BPI可以结合并中和内毒素，抑制内毒素刺激单核细胞产生细胞因子和炎症介质，从而保护机体免受损伤。另外，BPI对许多革兰氏阴性菌具有细胞杀伤作用，它通过与革兰氏阴性菌表面脂多糖(LPS)结合，破坏LPS在细胞膜上的正常排列，显著增强细菌细胞膜的通透性进而裂解细菌。此外，BPI全蛋白能增强中性粒细胞对细菌的吞噬。因此，BPI是一种重要的天然免疫防御因子，在革兰氏阴性菌感染的治疗方面具有良好的发展前景。目前有关硬骨鱼类BPI的报道不多，其生物学功能研究更是知之甚少。

发明内容

本发明目的在于提供一种鱼类(半滑舌鳎)杀菌通透性增强蛋白及其应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种鱼类杀菌通透性增强蛋白的重组蛋白，鱼类杀菌通透性增强蛋白的重组蛋白为以半滑舌鳎cDNA为模板，经引物F1和R1进行PCR扩增杀菌通透性增强蛋白基因，扩增产物经诱导表达、纯化即为半滑舌鳎的杀菌通透性增强蛋白重组蛋白，所述F1为5’-GATATCATGGTAGAAAACCCCGGGATTGAAA-3’；R1为5’-GATATCGAAAAACTCATGTGTGTGTTTGGGT-3’。

一种鱼类杀菌通透性增强蛋白的重组蛋白的应用，所述半滑舌鳎的杀菌通透性增强蛋白重组蛋白在与细菌特异性结合中的应用。

所述半滑舌鳎的杀菌通透性增强蛋白重组蛋白在与革兰氏阴性细菌特异性结合中的应用。

一种鱼类杀菌通透性增强蛋白的重组蛋白的应用，所述半滑舌鳎的杀菌通透性增强蛋白重组蛋白可应用于制备抑制革兰氏阴性细菌或病毒感染的制剂。

所述抗感染的细菌为荧光假单胞菌；病毒为细胞肿大病毒。

本发明具有如下优点：本发明的杀菌通透性增强蛋白能够结合多种革兰氏阴性细菌，并且能够显著提高鱼类的抗细菌和抗病毒能力。

附图说明

图1为本发明实施例提供的纯化的杀菌通透性增强蛋白电泳图。泳道1，分子量标准；泳道2,重组杀菌通透性增强蛋白rCsBPI。

图2为本发明实施例提供的重组杀菌通透性增强蛋白rCsBPI与细菌的结合能力检测结果。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明。实施例旨在对本发明进行举例描述，而非以任何形式对本发明进行限制。

在本发明实施例中所涉及到的常规性实验方法均采用如下方法：

1.质粒提取、DNA(PCR)产物纯化、DNA片段从凝胶中回收皆使用“天根生化科技(北京)有限公司”的相应试剂盒。

2.大肠杆菌用Hanahan方法(SambrookandRussell:MolecularCloning:ALaboratoryMannual.ColdSpringHarborLaboratoryPress2001)。

3.所有限制性内切酶和连接酶皆购自于“纽英伦生物技术有限公司”，北京。

实施例1

重组杀菌通透性增强蛋白rCsBPI的制备

1)表达rCsBPI的质粒pCsBPI的构建：

本发明的杀菌通透性增强蛋白CsBPI序列已公布(GenBankaccessionnumberXP_008316264.1)：