[发明专利]一种柱状黄杆菌基因定向敲除质粒及应用

权利要求书

1.一种柱状黄杆菌基因定向敲除质粒，所述质粒的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。

2.权利要求1所述质粒的制备方法，包括：

(1)穿梭质粒pCP23改造为线性载体

将分离纯化的穿梭质粒pCP23用SacI和KpnI进行双酶切，电泳结束后将大小为6103bp的片段切下，回收后即为pCP23线性载体；或用引物扩增穿梭质粒pCP23的除黄杆菌复制区域以外的序列，回收后即为pCP23线性载体；

(2)含负选择标记的自杀质粒的构建

将SEQ ID NO.2所示核苷酸序列与pCP23线性载体定向连接；取连接产物转化大肠杆菌，经筛选后，即得一种柱状黄杆菌基因定向敲除质粒。

3.权利要求1所述的质粒在定向敲除柱状黄杆菌目的基因中的应用。

4.权利要求1所述的质粒在构建柱状黄杆菌基因缺失弱毒疫苗中的应用。

5.权利要求1所述的质粒在构建柱状黄杆菌基因缺失株中的应用。