[发明专利]一种昆虫乙酰胆碱受体蛋白复合体的人工表达系统及其应用

权利要求书

1.一种昆虫乙酰胆碱受体蛋白复合体的人工表达系统，其特征在于所述的人工表达系统中除表达昆虫乙酰胆碱受体外还表达了TCP1蛋白复合体；所述的人工表达系统为非洲爪蟾卵母细胞表达系统，所述的昆虫乙酰胆碱受体由Genebank登陆号为KF873578的东亚飞蝗乙酰胆碱受体α1亚基和Genebank登陆号为KF813099的β1亚基组成；所述的TCP1蛋白复合体由以下各亚基组成：α亚基：其基因序列的Genebank登陆号为KF621132；β亚基：其基因序列的Genebank登陆号为KF621133；γ亚基：其基因序列的Genebank登陆号为KF621134；δ亚基：其基因序列的Genebank登陆号为KF813101；ε亚基：其基因序列的Genebank登陆号为KF621131；ζ亚基：其基因序列的Genebank登陆号为KF621135；η亚基：其基因序列的Genebank登陆号为KF621129；θ亚基：其基因序列的Genebank登陆号为KF621130。

2.人工表达昆虫乙酰胆碱受体蛋白复合体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）克隆乙酰胆碱受体和TCP1的基因并构建重组质粒；所述的昆虫乙酰胆碱受体由Genebank登陆号为KF873578的东亚飞蝗乙酰胆碱受体α1亚基和Genebank登陆号为KF813099的β1亚基组成；所述的TCP1蛋白复合体由以下各亚基组成：α亚基：其基因序列的Genebank登陆号为KF621132；β亚基：其基因序列的Genebank登陆号为KF621133；γ亚基：其基因序列的Genebank登陆号为KF621134；δ亚基：其基因序列的Genebank登陆号为KF813101；ε亚基：其基因序列的Genebank登陆号为KF621131；ζ亚基：其基因序列的Genebank登陆号为KF621135；η亚基：其基因序列的Genebank登陆号为KF621129；θ亚基：其基因序列的Genebank登陆号为KF621130；

（2）将所述的重组质粒进行体外转录获得目的基因的cRNA；

（3）将所述的cRNA转入到非洲爪蟾卵母细胞表达系统中；

（4）依据所用非洲爪蟾卵母细胞表达系统，培养适当的时间后，即可表达获得有功能的乙酰胆碱受体。

3.权利要求1所述的人工表达系统在检测、分析、筛选具有乙酰胆碱受体激动剂/拮抗剂活性的化合物中的应用。

4.一种检测、分析具有乙酰胆碱受体激动剂/拮抗剂活性的化合物的方法，其特征在于包括以下步骤：将利用权利要求1所述的人工表达系统表达的昆虫乙酰胆碱受体蛋白复合体与待检测、分析的化合物相接触、反应，检测昆虫乙酰胆碱受体蛋白复合体发出和/或导致的信号及信号变化，从而推断化合物是否具备乙酰胆碱受体激动剂/拮抗剂活性。

5.一种筛选具乙酰胆碱受体激动剂/拮抗剂活性的化合物的方法，其特征在于将待检测、分析的化合物与利用权利要求1所述的人工表达系统表达的昆虫乙酰胆碱受体蛋白复合体相接触、反应，检测昆虫乙酰胆碱受体蛋白复合体发出和/或导致的信号及信号变化，能够使昆虫乙酰胆碱受体蛋白复合体发出信号的为具有乙酰胆碱受体激动剂/拮抗剂活性的化合物；根据信号的强弱能够判断其活性的大小。