[发明专利]一种猪瘟脾淋源复合活疫苗的制备方法

权利要求书

1.一种猪瘟脾淋源复合活疫苗的制备方法，其特征在于包括以下工艺步骤：

（1）接种家兔的选择

选择生长状况良好、体重1.5-3kg的家兔；

（2）接种

取生产用毒种，用稀释液稀释，每只家兔耳静脉接种1ml，接种后家兔正常饲养；

（3）测温观察

家兔接种后，上、下午各测体温一次，24小时后，每隔6小时测体温一次，测温至72小时；

（4）收获

选择定型热和轻热反应兔，从体温下降及其以后的24小时内剖杀，以无菌手术采取脾脏；

（5）病毒悬液制备及检验

在无菌操作下剔除脂肪组织，将脾脏组织称重、剪碎，于同一容器内混合研磨，然后滤过，测定病毒含量，脾毒对家兔的最小感染量应≧10⁵/ml；

（6）将上述收获的全悬病毒液与鸡抗猪瘟病毒卵黄抗体进行混合吸附；

（7）将吸附后的抗原抗体复合物加入含免疫增强剂冻干保护剂，分装后经冷冻真空干燥制成猪猪瘟脾淋源征复合活疫苗。

2.如权利要求1所述的一种猪瘟脾淋源复合活疫苗的制备方法，其特征在于所述的步骤（6）中全悬病毒液与鸡抗猪瘟病毒卵黄抗体按体积比1:1混合，所述的全悬病毒液每毫升抗原含病毒10⁵RID，所述的鸡抗猪瘟病毒卵黄抗体每毫效价为1：1024。

3.如权利要求1所述的一种猪瘟脾淋源复合活疫苗的制备方法，其特征在于所述的步骤（6）中混合吸附条件15℃混合孵育2小时。

4.如权利要求1所述的一种猪瘟脾淋源复合活疫苗的制备方法，其特征在于所述的步骤（7）中抗原抗体复合物与冻干保护剂按体积比1:1混合。

5.如权利要求1所述的一种猪瘟脾淋源复合活疫苗的制备方法，其特征在于所述的步骤（7）中冻干保护剂为每1000ml磷酸缓冲液中含有中药多糖30～100g、中药黄酮20～60g、维生素组合5～20g，所述的中药多糖和中药黄酮从以下中药组合物中提取得到：垂盆草、金果榄、鸡矢藤、水牛角、蝼蛄、香薷、防己、半边莲和路路通，所述的维生素组合含有叶酸、烟酰胺、维生素B和维生素E。

6.如权利要求5所述的一种猪瘟脾淋源复合活疫苗的制备方法，其特征在于所述的中药多糖和中药黄酮的提取步骤为：

a、按垂盆草10～30份、金果榄20～40份、鸡矢藤10～20份、水牛角10～30份、蝼蛄10～30份、香薷10～20份、防己10～30份、半边莲10～30份和路路通10～20份称取各中药原料，切碎、洗净后用冷水浸泡过夜，再加入原料重量15倍的纯化水，水浴至90℃，并保持在90℃，熬制2小时，熬制过程中每10分钟搅拌一次；

b、弃去a中药渣，收集药液，室温冷却后经10000rpm离心10分钟，弃去沉淀，收集上清；

c、将b中上清进行醇沉，沉淀即为粗制中药多糖，上清即为粗制中药黄酮；

d、用灭菌纯化水洗涤c中粗制中药多糖，洗涤后用20倍量的42℃灭菌纯化水进行溶解，溶解后，按通过活性炭柱进行内毒素吸附，收集滤出液；

e、将d中上滤出液通过sevag法除去蛋白；

f、将e中中药多糖进行真空冷冻干燥制得中药多糖；

g、将c中粗制中药黄酮进行减压真空浓缩，浓缩物用灭菌注射用水稀释清洗，再次进行减压真空浓缩，如此三次后经冷冻真空干燥制成中药黄酮。

7.如权利要求5所述的一种猪瘟脾淋源复合活疫苗的制备方法，其特征在于所述的维生素组合含有叶酸20～30%、烟酰胺30～50%维生素B10～30%和维生素E 20～60%。