[发明专利]一种5，6-二甲基苯并咪唑含量检测方法

说明书

技术领域

本发明本方法属于化学分析领域，尤其涉及一种高效液相法测定5，6-二甲基苯并咪唑含量的方法。

背景技术

5，6-二甲基苯并咪唑作为维生素B₁₂合成的外源前体物，加入到发酵培养基中，通过微生物的生物合成过程直接结合到VB₁₂分子结构中去，而其自身的结构并没有多大变化，但是VB₁₂的产量却因加入5，6-二甲基苯并咪唑而有很大的提高。因此5，6-二甲基苯并咪唑含量的高低直接影响了VB₁₂的产量。

5，6-二甲基苯并咪唑结构如下：

现有技术中，5，6-二甲基苯并咪唑的含量测定采用的是高氯酸滴定法，在检测过程中使用冰乙酸、高氯酸等试剂，具有强腐蚀性，强刺激性，对人体会有灼伤，因此开发一种能够安全、准确测定5，6二甲基苯并咪唑的含量的方法一直是有待解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种安全可靠，且方法简易于操作，结果准确，重复性好的5，6-二甲基苯并咪唑含量检测方法。

为实现上述发明目的所采取的的技术方案为：

一种5，6二甲基苯并咪唑含量检测方法,其特征在于采用高效液相色谱法进行检测。

所述高效液相色谱法进行检测的具体过程为：采用流动相为溶剂制备标准品溶液和供试品溶液，以10-20ul的进样量进样后，按照外标法计算含量；

其中高效液相色谱条件为：

色谱柱：C8或C18色谱柱，

检测器：DAD检测器，

流动相：甲醇：磷酸氢二钠溶液(10g/L)(pH2.5-3.5)＝(25.0:75.0)，甲醇的比例为20.0-30.0％；

流速：0.60-1.20ml/min；

检测波长：265-276。

所述标准品溶液和供试品溶液浓度为0.1mg/ml-2.0mg/ml。

本发明采用高效液相色谱法进行5，6-二甲基苯并咪唑的含量检测，无滴定法所使用的强腐蚀性，强刺激性溶剂，安全可靠。且通过外标法对样品中5，6-二甲基苯并咪唑含量进行定量，方法准确，简单、重复性好，灵敏度高，当5,6二甲基苯并咪唑在0.1mg/ml-2.0mg/ml之间时，均有较好的线性关系，其线性相关系数为0.9996。

附图说明

图1为5,6-二甲基苯并咪唑对照品的HPLC检测图谱；

图2为5,6-二甲基苯并咪唑的HPLC检测图谱；

图3为5,6-二甲基苯并咪唑的线性关系图与回归方程。

具体实施方式

为了使本领域的技术人员更好的理解发明的技术方案，下面结合具体实施方法对本发明所述技术方案作进一步的详细说明。

实施例1

5，6-二甲基苯并咪唑分析样品的制备：

标准品溶液的制备：称取5,6-二甲基苯并咪唑标准品50mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，摇匀。用1ml注射器取溶液经0.45um的有机滤头过滤，得标准品溶液。

供试品溶液的制备：称取5,6-二甲基苯并咪唑样品50mg，精密称定，置于100ml容量瓶中,加流动相适量，溶解后定容至刻度，摇匀。用1ml注射器取溶液经0.45um的有机滤头过滤，得供试品溶液。

标准品溶液和供试品溶液各制得5份。

色谱分析条件：岛津LC-20A液相色谱仪，Waters C18色谱柱(250*4.6,5um)；流动相：甲醇：磷酸氢二钠溶液(10g/L)(pH3.0)＝(25.0:75.0)；流速：0.80ml/min；检测波长：270nm；进样量10ul，检测器：紫外检测器；柱温箱35℃。

按上述色谱条件，对所有标准品和供试品分别进样，如图1所示，标准品溶液5个样品分别进样所得峰面积为1500428，RSD为0.15％；供试品溶液的5个样品所得峰面积平均值为1454257，RSD为0.09％。

根据公式：

5,6-二甲基苯并咪唑的含量：a＝A_样M_标/A_标M_样*100％。

采用外标法将标准品和供试品平均代入即可得供试品5,6-二甲基苯并咪唑的含量为99.55％。

本发明实施例1所述检测方法的方法学考察：

(1)精密度实验