[发明专利]作用于PNPO基因的shRNA构建及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体地，涉及作用于PNPO基因的shRNA构建及其用途。

背景技术

磷酸吡哆醇氧化酶(PNPO)是催化磷酸吡哆醇(PNP)和磷酸吡哆胺(PMP)合成磷酸吡哆醛(PLP，维生素B6的活性形式)的氧化酶。PLP是多种酶的辅酶，参与140多种催化反应，如同型半胱氨酸等氨基酸的代谢、儿茶酚胺等神经递质的合成等。

肝脏或神经来源的肿瘤被检测出PNPO酶无活性(1998-Emily O.Ngo)；在乳腺癌T47D细胞(tamoxifen-sensitive，ER-positive)中，PNPO的表达可受雌二醇和他莫昔芬的调控(2006Mariam H)；多例病历报道显示PNPO基因突变可致PNPO酶缺陷，诱导新生儿癫痫性脑病。

卵巢癌，又称为卵巢恶性肿瘤，是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一，发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌而列居第三位。但卵巢上皮癌死亡率却占各类妇科肿瘤的首位，对妇女生命造成严重威胁。卵巢癌因病理类型不同而治疗方案不同，多用手术治疗联合化疗等综合治疗，但其效果有限。可见，积极开发卵巢癌的治疗手段和药物是十分必要的。

目前还未见PNPO在卵巢癌中的相关研究，也未见PNPO抑制肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭的相关报道。如PNPO能成为潜在的卵巢癌的治疗靶点，则用PNPO的抑制剂等方法敲降PNPO的表达将能够在卵巢癌的治疗中发挥重大作用。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种作用于PNPO基因的shRNA及其用途。

本发明提供了一种siRNA，所述的siRNA包含以下序列：

正义链：5’-GACUGGCUCUAUGAGAGAC-3’，

反义链：5’-GUCUCUCAUAGAGCCAGUC-3’；

本发明还提供了一种用于敲降PNPO基因的DNA双链序列，所述的DNA双链序列包含以下序列：

上游链：5'-GACTGGCTCTATGAGAGACTTCAAGAGAGTCTCTCATAGAGCCAGTCTTTTTT-3'，

下游链：5'-AAAAAAGACTGGCTCTATGAGAGACTCTCTTGAAGTCTCTCATAGAGCCAGTC-3'。

本发明还提供了一种构建物，所述的构建物包含以下DNA双链序列：

上游链：5'-GACTGGCTCTATGAGAGACTTCAAGAGAGTCTCTCATAGAGCCAGTCTTTTTT-3'；

下游链：5'-AAAAAAGACTGGCTCTATGAGAGACTCTCTTGAAGTCTCTCATAGAGCCAGTC-3'。

优选地，所述的构建物为慢病毒载体。

本发明还提供了所述的siRNA、所述的DNA双链序列或所述的构建物在制备治疗卵巢癌的药物中的应用。

本发明还提供了所述的siRNA、所述的DNA双链序列或所述的构建物在制备抑制卵巢癌细胞增殖、迁移或侵袭的试剂中的应用。

作为本发明的一种具体实施方式，所述的卵巢癌细胞来自于卵巢癌细胞株SK-OV-3或OVCAR-3。

本发明还提供了所述的siRNA、所述的DNA双链序列或所述的构建物在非治疗目的的抑制卵巢癌细胞增殖、迁移或侵袭中的应用。

本发明优点在于：

1、本发明针对PNPO设计了合适的siRNA和表达shRNA的DNA双链序列，并构建了包含上述DNA双链序列的慢病毒载体。通过效果试验证实本发明的siRNA以及表达shRNA的构建物能够显著降低PNPO mRNA和蛋白表达量，敲降作用十分明显。鉴于PNPO为一种潜在的卵巢癌治疗靶点，因此本发明的siRNA和表达shRNA的构建物可用于制备治疗卵巢癌的药物。

2、本发明首次证实敲降PNPO可抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭，并导致细胞周期G2/M期阻滞，提示PNPO是一种潜在的治疗卵巢癌的新型靶点，可针对卵巢癌PNPO高表达的病人给予降低PNPO的表达以达到治疗目的，同时有利于进一步研究卵巢癌的发生发展机制。

附图说明

图1.PNPO-siRNA对PNPO的敲除效果验证。其中，图1A为qPCR结果，图1B为Western-blot结果。