[发明专利]一种从雪胆中提取雪胆甲素的方法

说明书

技术领域

 本发明涉及一种植物中有效成分的分离纯化方法，属于生物技术领域。背景技术

雪胆甲素，别名：雪胆素甲；英文名称：Cucurbitacins，分子式：C₃₀H₄₂O₆，分子量：498.656，CAS号：60137-06-6，分子结构式：

雪胆为葫芦科雪胆属植物，具有消热解毒，抗菌消炎之功效。用于治疗菌痢、肠炎、支气管炎、急性扁桃体炎。雪胆块茎含雪胆素甲，雪胆素乙，竹节人参皂甙，齐墩果酸-β-葡萄糖酯等。其中雪胆素是主要功能性成分，雪胆素为葫芦科雪胆属植物中提取的雪胆素甲和雪胆素乙的混合物。雪胆素甲有清热解毒，抗菌消炎的功能。

经专利文献检索，目前国内外尚未见雪胆甲素的提取工艺。

发明内容

本发明是针对现有制备雪胆甲素的方法所存在的缺陷和不足而进行的研究，旨在提供一种高效性和选择性、产率高、纯度高、低污染的制备方法。

为实现上述目的，本发明的技术方案按照下列步骤进行：

将干燥的雪胆药材粉碎，过20~60目筛；取一定量的药材粉末加入料液比为1：3~6倍、60%~95%的乙醇溶剂，并同时加入粉末重量0.1%~0.5%的生物酶在pH值4~5，温度为45~50℃的条件下酶解1~3h；酶解完成后，将酶解物在温度为50~60℃的条件下微波提取300~900s，过滤，滤液减压浓缩至无醇味，收集浓缩液备用；将浓缩液首先在温度为20~40℃的条件下，用0.4微米的陶瓷膜分离出粗提液里面的蛋白质、多糖、鞣质等物质，再将所得到的提取液上聚酰胺层析柱先用2~4倍柱体积的水洗脱，再用3~5倍柱体积、60~80%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；乙醇洗脱液减压浓缩至原体积的1/5~1/2，静置，让其在冰水浴中冷却结晶，得粗结晶样品；将粗结晶样品溶解于热水中，煮沸，冷却，加入质量体积比为1：50~70的雪胆甲素晶种，搅拌的条件下，在冰水浴中重结晶1~3次，过滤，收集结晶物即得雪胆甲素。

所述的生物酶为果胶酶、纤维素酶、半纤维素酶中的一种。

所述微波的提取功率为800~1000W。

所述聚酰胺树脂的粒径为60~80目。

雪胆甲素是胞内物质，植物细胞壁主要由纤维素和果胶组成。纤维素酶、果胶酶、半纤维素酶是可以将其水解。雪胆细胞用生物酶处理后，细胞壁的水解破裂，有利于细胞内有效成分的溶出。而微波是一种超高速电磁波，具有很强的穿透作用，使植物细胞中的水分或有机溶剂迅速升温升压，细胞壁穿孔，使成分从细胞中溶出，以增加雪胆中有效成分在溶剂中的溶解，而且微波电磁场使分子运动短时间内加剧，从而缩短了时间，提高了提取率。本发明把酶法和微波提取两种技术联用，优势互补，大大地提高了雪胆甲素的提取率。另外聚酰胺层析柱与陶瓷膜的联用来纯化雪胆甲素，可以使所得产品的纯度在一定程度上得到很大的提高。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

实施例1：

将干燥的雪胆药材粉碎，过20目筛；取一定量的药材粉末加入料液比为1：3倍、60%的乙醇溶剂，并同时加入粉末重量0.1%的纤维素酶在pH值4，温度为45℃的条件下酶解1h；酶解完成后，将酶解物在温度为50℃、功率为800~1000W的条件下微波提取300s，过滤，滤液减压浓缩至无醇味，收集浓缩液；将浓缩液首先在温度为20℃的条件下，用0.4微米的陶瓷膜分离出粗提液里面的蛋白质、多糖、鞣质等物质，再将所得到的提取液上粒径大小为60目的聚酰胺层析柱，先用2倍柱体积的水洗脱，再用3倍柱体积、60%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；乙醇洗脱液减压浓缩至原体积的1/2，静置，让其在冰水浴中冷却结晶，得粗结晶样品；将粗结晶样品溶解于热水中，煮沸，冷却，加入质量体积比为1：70的雪胆甲素晶种，搅拌的条件下，在冰水浴中重结晶1次，过滤，收集结晶物即得雪胆甲素。经检测，所得产品中雪胆甲素的纯度为88.5%。

实施例2：